24小时热门版块排行榜     石溪大学接受考研调剂申请>

【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
查看: 508  |  回复: 6
【悬赏金币】回答本帖问题,作者Milkttttea将赠送您 6 个金币

Milkttttea

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶切完连接构建载体一直不成功

切入DNA片段1385bp,载体4729bp

跑胶看亮度,片段大概10ng/ul,载体大概40ng/ul

片段加了15ul,载体2ul,buffer2ul,T4连接酶1ul,摩尔比大概1:6.5。

为什么一直连接不上呢?amp板上一个单克隆都没有

卡在这个实验已经一个月多了真的头秃了!

求帮助!

@youlinglyw @biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan 发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乌克兰跑男

铜虫 (正式写手)

这浓度够了,不加水连接,变一下比例。质粒上有其他抗性的话amp最后选

发自小木虫Android客户端
我思故我在
2楼2022-08-07 14:16:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

030Selma

金虫 (正式写手)

3楼2022-08-07 15:13:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Milkttttea

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 乌克兰跑男 at 2022-08-07 14:16:39
这浓度够了,不加水连接,变一下比例。质粒上有其他抗性的话amp最后选

昨天又做了两板,载体53.2ng/ul,片段15.7ng/ul,仪器测得浓度,OD260/280都有1.8。1:3比例做了10体系,1:7做了20体系,都没有长单克隆,我真的好迷茫啊,到底问题出在哪里了

发自小木虫IOS客户端
4楼2022-08-10 09:37:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Milkttttea

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 030Selma at 2022-08-07 15:13:27
要不换无缝克隆?

刚买了维诺赞的无缝克隆,我看了一下说明书,说同源臂最好40-60GC,但是我看我有一个酶切位点怎样最低都要62%,这样影响大吗?

发自小木虫IOS客户端
5楼2022-08-10 17:39:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Milkttttea

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by Milkttttea at 2022-08-10 17:39:42
刚买了维诺赞的无缝克隆,我看了一下说明书,说同源臂最好40-60GC,但是我看我有一个酶切位点怎样最低都要62%,这样影响大吗?
...

而且GC有62%的话,同源臂就要有31bp这么长了(不包括酶切位点)

发自小木虫IOS客户端
6楼2022-08-10 20:54:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

030Selma

金虫 (正式写手)

应该没问题,稍微加长5分钟反应时间试试

发自小木虫Android客户端
7楼2022-08-16 23:30:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Milkttttea 的主题更新
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 普通院校药学硕士,做合成的,感觉找不到工作 +12 pom戴墨镜 2024-04-24 20/1000 2024-04-27 22:08 by saenpe
[基金申请] 优青已经开始了么? +3 majunge000 2024-04-27 3/150 2024-04-27 18:51 by spring_1987
[高分子] 请问UV灯是365nm的,那么选光引发剂的波长选多少的?要完全一致吗? +5 engledd2004 2024-04-21 5/250 2024-04-27 18:32 by quirinus
[考博] 材料方向24博士申请/一作SCI三篇 +3 白天不碰 2024-04-24 5/250 2024-04-27 17:41 by 安塔瓦拉多
[考博] 真的好想读博! +16 wangzhe_bs 2024-04-22 23/1150 2024-04-27 17:10 by @tanzelin
[留学DIY] 10043以后咋出去啊 +4 RuiLove 2024-04-22 4/200 2024-04-27 16:03 by 鱼翔浅底1
[论文投稿] Nature一直在编辑手里,考虑好几天了,是悬了吗 +13 彩虹初见 2024-04-24 13/650 2024-04-27 15:24 by cuan118
[考博] 25年博士申请 +7 Changzixuan 2024-04-25 13/650 2024-04-27 14:11 by 我属驴核动力驴
[基金申请] 两类问题算是白选了~ +8 jurkat.1640 2024-04-23 13/650 2024-04-27 12:03 by 淀粉搬运工
[基金申请] "颜宁:基础研究应顶天立地"能做到基础研究同时顶天立地的才是牛人 +6 zju2000 2024-04-24 6/300 2024-04-27 10:17 by kcmn1000
[论文投稿] 投稿RSC旗下杂志突然间看不到投稿状态,里面投稿的文章信息不见了,有遇到过的吗? 50+3 dlying 2024-04-26 3/150 2024-04-27 09:58 by bobvan
[硕博家园] 聊天 +12 暮色恋伊人 2024-04-22 13/650 2024-04-27 08:40 by WASM
[考博] 申博求助 +4 dskabdh 2024-04-24 11/550 2024-04-26 15:54 by dskabdh
[考研] 381求调剂 +4 小刺猬987654321 2024-04-25 6/300 2024-04-26 10:57 by czl12138
[教师之家] 某种做法不行。说过几遍了。同学还那样做。再那样做就给低分 +4 河西夜郎 2024-04-24 4/200 2024-04-26 08:51 by Quakerbird
[基金申请] 国社科项目,你们学校都限额申报吗? +7 屡战屡败 2024-04-21 10/500 2024-04-25 12:10 by 屡战屡败
[电化学] 耗材发问 +4 Happy C 2024-04-22 4/200 2024-04-25 11:03 by 普通小虫
[教师之家] 大家访学都是怎么找的啊? +3 luokereng 2024-04-22 3/150 2024-04-24 11:40 by xuechenli
[考博] 申博成果界定是根据Jcr分区还是中科院分区 +4 我属驴核动力驴 2024-04-22 5/250 2024-04-24 08:47 by 晓目崇
[考博] 研二光催化6月底4篇2区 +7 wjtab 2024-04-22 11/550 2024-04-23 06:59 by byron2012
信息提示
请填处理意见