需要跑琼脂糖胶鉴定酶切效果，配胶时注意选择合适的胶浓度，原则是分子量越大，胶浓度越校跑胶完成后紫外灯下一般会有两段即为成功：载体和切下来的片段，根据结果进行胶回收，注意切下来的...

切入DNA片段1385bp，载体4729bp跑胶看亮度，片段大概10ng/ul，载体大概40ng/ul片段加了15ul，载体2ul，buffer2ul，T4连接酶1ul，摩尔比大概1:6.5。为什么一直连接不上呢？amp板上一个单克隆...

菌落PCR（ColonyPCR）不必提取基因组DNA，不必酶切鉴定，而是直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，省时少力。...4.不对称PCR低浓度的引物（限制引物）首先被用完，随后只有高浓度的...

菌落PCR（ColonyPCR）不必提取基因组DNA，不必酶切鉴定，而是直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，省时少力。...4.不对称PCR低浓度的引物（限制引物）首先被用完，随后只有高浓度的...

1.酶切：我目前想用pcs2载体（4700bp）与想要的几个基因重组构建，分别是基因A（1700bp），基因B（1300bp），基因C（1000bp）。...说如果酶切位点在dna两头酶切得到的粘性末端不好，连接效率低...

由于担心无缝克隆对10Kb以上质粒的保真度，故直接采用双酶切连接方法（没有采用T载体）。...与此同时，我还将同一载体但目的片段稍小的质粒构建成功，中提出来的质粒不存在任何问题。...

分别用2对引物做PCR，酶切目的片段和空载4-5h，l连接4℃过夜，转化时涂了2个板，克隆时每个板挑了5个单菌落，摇菌过夜，质粒小抽做完之后，最后双酶切鉴定时，只有2个有跑出目的片段的条带...

在小木虫上，经常有人构建质粒做了很久一直做不出来，发帖求助。构建质粒涉及到PCR、酶切、连接、转化等多个步骤，可能出问题的点很多。你可以随便扩增一段片段，连接到T载体上面，如果能...

首先，我获得了我的目的基因，与pET28a连接后，成功构建载体。我进行了菌液PCR验证，质粒PCR验证，质粒双酶切验证，之后是送去测序。所有的结果足够表明我已经构建载体成功了。之后就是转化...