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liwenfeng202

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】+ 细胞出现诡异死亡,请达人教我

我的细胞(海水鱼类鳍条细胞)在传代之后24小时之内没有问题,24小时之后开始同时在多个位置出现死亡,细胞变圆,形成空斑,并且迅速蔓延,36小时左右培养瓶中有60%细胞变圆,48小时之内几乎所有细胞死亡。这个问题已经出现几周了,无论是原代,23456代都是同样的死亡,消化条件我更改过很多次了,无效,营养成分我添加的很足应该也没有问题,培养液也不变浑浊,应该不是细菌污染,真菌污染也没有观察到。现在请达人指教,有没有别的什么问题在,谢谢!
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Rubisco580

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 9-11 15:31
楼主的细胞不是癌细胞,所以体外培养肯定会死。可能缺少什么生长因子之类的,我不是很清楚你的细胞的特性,所以无法定论。
其次,细胞变圆不一定是细胞死亡,楼主提到消化,那么细胞应该是贴壁的吧。贴壁细胞分裂的时候会变圆并漂起来,分裂完后会贴回去。死细胞在显微镜下看的时候是一团黑,没有折光率变化,活细胞有折光率变化。
还有,楼主用的培养瓶/培养皿会不会有问题?我在养贴壁细胞的时候见到过一些很差的培养皿/培养瓶,细胞根本不贴壁。
最后嘛,楼主有没想过是支原体污染?支原体污染可以用荧光染色法或者PCR鉴定,这些书上都有方法的。
希望楼主细胞能长好,呵呵。

[ Last edited by Rubisco580 on 2009-9-11 at 15:32 ]
3楼2009-09-11 15:25:44
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
污染了病毒
最好能贴图
2楼2009-09-11 12:26:34
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liwenfeng202

银虫 (小有名气)

回复2楼

应该不是病毒,因为只要不传代,细胞就没事,传代的几乎都会死亡,我的老师说不是很像病毒感染,这个我是新手,这是第一次发帖,图片应该怎么上传啊?谢谢给我指教。
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4楼2009-09-12 12:51:58
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liwenfeng202

银虫 (小有名气)

回复3楼

我的细胞不是癌细胞,是我从原代开始传代,自己养的细胞,纤维状,贴壁。我已经添加了bFGF,那些空斑里的细胞高倍镜镜检可见细胞呈圆形黑色。我的培养瓶用的是CORNING的,应该问题不大,支原体污染我倒是也有考虑过,但是支原体污染也可以造成这么大规模的死亡吗?
还有就是前面我换个一种培养液,由Hyclone换成Gibco的,是不是因为这个原因呢?或者要可能是支原体的话,我就检测一下。谢谢达人指教。
图片我上传了,请个人前辈多多提些意见,小弟感激不尽!!
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5楼2009-09-12 13:24:01
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