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求助，sgRNA引物设计时，为什么BsaI的酶切位点为GGCA和AAAC? 已有2人参与
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求助，bsai的酶切位点为 5’.....ggtctc（n）1.....3‘ 3’.....ccagag（n）5......5‘ 为什么在设计sgrna时，正向引物的5’端加入的碱基是ggca，反向引物的5’端加入的是aaac? |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
一粒种子: 金币+10, 原来是与载体的结构序列有关，非常感谢您！ 2022-07-19 15:39:15
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一粒种子: 金币+10, 原来是与载体的结构序列有关，非常感谢您！ 2022-07-19 15:39:15
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BsaI酶的识别位点，和剪切位点是不同的。 5’.....ggtctc（n）1.....3‘ 3’.....ccagag（n）5......5‘ ggtctc是识别位点，然后+1后才会切，后面的序列可以随便是什么。而当时这个载体的发明人，就恰好设计成ggca。 另一端为什么是AAAC呢？一位还有第二个BsaI酶的位点，载体的发明人第二个切的地方设计成AAAC。 你仔细把序列看一下，就会明白 |
2楼2022-07-16 13:46:52
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3楼2022-07-16 18:55:34
4楼2022-07-19 15:40:01