24小时热门版块排行榜    

查看: 2202  |  回复: 6
当前主题已经存档。

zhangn516

[交流] 为什么要做TA克隆?

为什么不能直接连到表达载体上,然后测序,为什么一定要先连到TA克隆上然后测序在酶切连到表达载体上呢?

请教大家:TA克隆的必要性是什么呢?

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-16 at 17:08 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bioxixi

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-10 17:30
350784478(金币+2,VIP+0):感谢回答 9-16 17:08
楼主是新手?
因为TA克隆简单成功率高,大多数的Taq酶都会在PCR产物的末端加一个碱基A,而T载体的缺口有一个凸出的T,正好可以配对,省去了对克隆载体和PCR产物的酶切,而且T载体连接的效率高,操作简单,可进行测序后对正确克隆扩大培养,切下目的片段,用于后续实验,这样得到的目的片段量大而且序列单一准确。大体就这些吧。
2楼2009-09-10 14:22:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bioxixi

木虫 (著名写手)

★ ★
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-10 17:30
又:可以直接连到表达载体上,然后测序的,不是一定要TA克隆的,只是TA克隆有如上的优点。
3楼2009-09-10 14:25:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-10 17:31
直接将pcr产物进行酶切不易产生粘性末端,连表达载体就比较难。先连T再酶切下目的片段产生粘性末端的概率就大多了。
Thank-you,so-blue.
4楼2009-09-10 14:59:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-10 17:31
也有TA克隆到表达载体的,又方便又省事!
5楼2009-09-10 15:43:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouhuaxi

铜虫 (正式写手)

★ ★
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-10 17:31
上边木虫讲得很好,补充一点 相比PCR产物,TA克隆还有一个好处就是便于克隆目的片段的长期保存,
6楼2009-09-10 15:54:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anik

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
还有最主要的就是可以挑选单克隆。
PCR为体外扩增,碱基突变机率非常大。
TA克隆转到大肠杆菌中,单克隆菌体自身的修复机制可以保证单一的克隆,利于筛选需要的序列等,总之,TA克隆的优点是很多的,也是有必要做这一步的。
7楼2009-09-10 18:11:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhangn516 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +23 医学老男孩 2026-08-13 49/2450 2026-08-14 20:02 by zhaifei
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +6 启萌科技 2026-08-12 21/1050 2026-08-14 19:48 by 启萌科技
[基金申请] filecode +6 cratir 2026-08-14 10/500 2026-08-14 18:29 by 笑叹辞穷
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +10 Tide man 2026-08-10 11/550 2026-08-14 10:30 by 沁言学术
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见