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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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zhangn516

[交流] 为什么要做TA克隆?

为什么不能直接连到表达载体上,然后测序,为什么一定要先连到TA克隆上然后测序在酶切连到表达载体上呢?

请教大家:TA克隆的必要性是什么呢?

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-16 at 17:08 ]
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bioxixi

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-10 17:30
350784478(金币+2,VIP+0):感谢回答 9-16 17:08
楼主是新手?
因为TA克隆简单成功率高,大多数的Taq酶都会在PCR产物的末端加一个碱基A,而T载体的缺口有一个凸出的T,正好可以配对,省去了对克隆载体和PCR产物的酶切,而且T载体连接的效率高,操作简单,可进行测序后对正确克隆扩大培养,切下目的片段,用于后续实验,这样得到的目的片段量大而且序列单一准确。大体就这些吧。
2楼2009-09-10 14:22:34
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bioxixi

木虫 (著名写手)

★ ★
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-10 17:30
又:可以直接连到表达载体上,然后测序的,不是一定要TA克隆的,只是TA克隆有如上的优点。
3楼2009-09-10 14:25:12
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-10 17:31
直接将pcr产物进行酶切不易产生粘性末端,连表达载体就比较难。先连T再酶切下目的片段产生粘性末端的概率就大多了。
Thank-you,so-blue.
4楼2009-09-10 14:59:57
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-10 17:31
也有TA克隆到表达载体的,又方便又省事!
5楼2009-09-10 15:43:56
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zhouhuaxi

铜虫 (正式写手)

★ ★
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-10 17:31
上边木虫讲得很好,补充一点 相比PCR产物,TA克隆还有一个好处就是便于克隆目的片段的长期保存,
6楼2009-09-10 15:54:11
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anik

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
还有最主要的就是可以挑选单克隆。
PCR为体外扩增,碱基突变机率非常大。
TA克隆转到大肠杆菌中,单克隆菌体自身的修复机制可以保证单一的克隆,利于筛选需要的序列等,总之,TA克隆的优点是很多的,也是有必要做这一步的。
7楼2009-09-10 18:11:01
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