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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 为什么要做TA克隆？
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zhangn516

[交流] 为什么要做TA克隆？

为什么不能直接连到表达载体上，然后测序，为什么一定要先连到TA克隆上然后测序在酶切连到表达载体上呢？

请教大家：TA克隆的必要性是什么呢？

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-16 at 17:08 ]
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1楼 2009-09-10 13:33:14
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anik

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
还有最主要的就是可以挑选单克隆。
PCR为体外扩增，碱基突变机率非常大。
TA克隆转到大肠杆菌中，单克隆菌体自身的修复机制可以保证单一的克隆，利于筛选需要的序列等，总之，TA克隆的优点是很多的，也是有必要做这一步的。
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7楼2009-09-10 18:11:01
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bioxixi

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-10 17:30
350784478(金币+2,VIP+0):感谢回答 9-16 17:08
楼主是新手？
因为TA克隆简单成功率高，大多数的Taq酶都会在PCR产物的末端加一个碱基A，而T载体的缺口有一个凸出的T，正好可以配对，省去了对克隆载体和PCR产物的酶切，而且T载体连接的效率高，操作简单，可进行测序后对正确克隆扩大培养，切下目的片段，用于后续实验，这样得到的目的片段量大而且序列单一准确。大体就这些吧。
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2楼2009-09-10 14:22:34
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bioxixi

木虫 (著名写手)
★ ★
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-10 17:30
又：可以直接连到表达载体上，然后测序的，不是一定要TA克隆的，只是TA克隆有如上的优点。
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3楼2009-09-10 14:25:12
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-10 17:31
直接将pcr产物进行酶切不易产生粘性末端，连表达载体就比较难。先连T再酶切下目的片段产生粘性末端的概率就大多了。
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Thank-you，so-blue.
4楼2009-09-10 14:59:57
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