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doris0520

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[交流] PCR扩增条件摸索

本人用PUC19的模板扩增100bp片段，以前扩的都很好，最近突然就扩不出来了，没有100bp带，而且条带都是弥散的。后来将酶量减少，能扩出来了，但是第二天同样的条件又没有结果了（没有100bp片段且条带弥散），请教一下高手到底是什么原因？

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1楼2009-09-10 09:06:59

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doris0520

金虫 (小有名气)

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同样的试剂，我换了个可以扩500bp的引物和100bp的引物一起进行PCR，在同一个机器上用相同的程序运行，结果500bp的条带非常好，100bp的还是全部弥散。
我目前已经换过很多个模板而且稀释不同倍数，改变酶的加入量，使用不同的酶，改变引物加入量，结果都不行，我都快疯了。。。。
体系如下：
dNTP（10nM） 1ul
引物F       2ul
引物R             2ul
模板          1ul
Taq                1ul
10*bf             5ul
水       至50ul