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doris0520

金虫 (小有名气)

[交流] PCR扩增条件摸索

本人用PUC19的模板扩增100bp片段,以前扩的都很好,最近突然就扩不出来了,没有100bp带,而且条带都是弥散的。后来将酶量减少,能扩出来了,但是第二天同样的条件又没有结果了(没有100bp片段且条带弥散),请教一下高手到底是什么原因?
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spiderboy

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
出现这种情况可以说你的扩这个的PCR条件还不够优化,所以会出现结果不稳定的情况。。这种现象不诡异,确实是因为条件还不是最好的,所以实验中还有很多因素会成为决定实验结果的主要因素,比如操作多振荡了一下,等等。。
所以,仍需再摸下条件。。你的体系和反应条件温度是怎样的?
5楼2009-09-10 21:00:11
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
......诡异,建议LZ发BB攒人品。

考虑一下是不是模板的问题,比如反复冻融导致模板降解了。也许你那个弥散的条带是引物二聚体?
2楼2009-09-10 10:26:22
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doris0520

金虫 (小有名气)

我的模板是新配的第一次还好用,-20度冻存一晚第二天用应该没关系吧   弥散的条带在400-800bp左右,比引物二聚体大,应该不是
3楼2009-09-10 16:13:48
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yxx41

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 9-10 20:16
这个确实有够诡异啊。
要不来次彻底的清理,工作地点该灭菌的灭菌,该清理的清理。提取DNA的试剂重新配制,然后再试试啊。
我以前也是这样啊,然后彻底从头再来,现在结果还是比较稳定。
内事不决问百度,外事不决问Google,横批:wikipedia
4楼2009-09-10 18:59:00
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