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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于PCR的酶
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蓝色丝雨22

铁虫 (初入文坛)

[交流] 关于PCR的酶 已有2人参与

请问下，为什么PCR中的单管的酶不能震荡，但是配好PCR体系之后就可以震荡混匀了？
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1楼 2022-06-13 20:48:38
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)
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一般不建议振荡，吹打足够混匀了。酶体积少，振荡以后管盖、管壁上很多，还得离心，离心完还得吹打，不然甘油溶液粘度大，上下层不均匀。反应液就不一样了，粘度小很多。
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核酸提取与Taqman诊断
2楼2022-06-15 08:08:26
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看海的snoopy

金虫 (正式写手)
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酶是蛋白质，一般对蛋白质失活的任何理化因素都会对酶的活性产生影响从而导致催化性质降低。其次是要看你的酶是什么酶了：一般Taq酶稳定性好，振荡一下没什么问题；但如果是其他酶的话有可能对酶的稳定性和活性会产生影响。至于说为什么配好的PCR体系可以振荡，是因为1. 酶被稀释，2. 整个体系不粘稠，对酶有一个保护作用，3. 确实要混匀，不然PCR扩增达不到预期结果。
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3楼2022-06-16 16:17:30
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蓝色丝雨22

铁虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by 看海的snoopy at 2022-06-16 16:17:30
酶是蛋白质，一般对蛋白质失活的任何理化因素都会对酶的活性产生影响从而导致催化性质降低。其次是要看你的酶是什么酶了：一般Taq酶稳定性好，振荡一下没什么问题；但如果是其他酶的话有可能对酶的稳定性和活性会产 ...

感谢回复，不过我还有个疑问，甘油不是对酶起保护作用的嘛，为什么配好的体系不粘稠反而对酶保护？
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4楼2022-06-17 18:15:21
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蓝色丝雨22

铁虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by 山舞银蛇 at 2022-06-15 08:08:26
一般不建议振荡，吹打足够混匀了。酶体积少，振荡以后管盖、管壁上很多，还得离心，离心完还得吹打，不然甘油溶液粘度大，上下层不均匀。反应液就不一样了，粘度小很多。

好的，感谢！另外想问下预混液复溶后，配制前，是直接瞬离还是震荡后瞬离，两者对结果有影响不？
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5楼2022-06-17 18:18:32
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)
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5楼: Originally posted by 蓝色丝雨22 at 2022-06-17 18:18:32
好的，感谢！另外想问下预混液复溶后，配制前，是直接瞬离还是震荡后瞬离，两者对结果有影响不？...

我一般不振荡，瞬离以后，枪头吹打几次
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核酸提取与Taqman诊断
6楼2022-06-20 08:36:31
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看海的snoopy

金虫 (正式写手)
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4楼: Originally posted by 蓝色丝雨22 at 2022-06-17 18:15:21
感谢回复，不过我还有个疑问，甘油不是对酶起保护作用的嘛，为什么配好的体系不粘稠反而对酶保护？...

甘油是溶于水的亲，所以体系配好之后不粘稠；配好的体系再振荡的话，个人感觉酶在粘稠环境中和水相环境中所受的力的大小不一样，所以相比之下振荡不会比在纯酶体系下振荡对酶的损耗大，应该理解为相对损害较轻~
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7楼2022-06-20 16:14:40
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蓝色丝雨22

铁虫 (初入文坛)
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6楼: Originally posted by 山舞银蛇 at 2022-06-20 08:36:31
我一般不振荡，瞬离以后，枪头吹打几次...

哦哦，感谢！
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8楼2022-06-21 09:01:50
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蓝色丝雨22

铁虫 (初入文坛)
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7楼: Originally posted by 看海的snoopy at 2022-06-20 16:14:40
甘油是溶于水的亲，所以体系配好之后不粘稠；配好的体系再振荡的话，个人感觉酶在粘稠环境中和水相环境中所受的力的大小不一样，所以相比之下振荡不会比在纯酶体系下振荡对酶的损耗大，应该理解为相对损害较轻~...

原来是这样，谢谢！
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9楼2022-06-21 09:03:29
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