应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » 求助！做EMSA，蛋白与DNA不结合
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1302  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者SJYyn将赠送您 5 个金币

SJYyn

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助！做EMSA，蛋白与DNA不结合 已有1人参与

目前是探针做了梯度都自己泳下去了，蛋白浓度的数量级参考了文献，用了两个浓度。
我怀疑是含蛋白的溶液有问题，原本的包含蛋白的缓冲液是50 mM NaH2PO4，300 mM NaCl，300mM imidazole，用NaOH 调到pH 8.0，我想把蛋白换到一个不含咪唑的溶液里，且不让蛋白失活，请问应该配制什么样的PBS缓冲液呢？

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2022-04-23 12:25:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
盐浓度太高了（磷酸盐 50mM， NaCl, 300mM，另外NaOH调节，整体盐浓度  >350 mM），而且不建议用磷酸盐。

建议 30 mM Tris-His, pH 8.0, 50 mM NaCl 试试， good luck
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

SJYyn
行至水穷处，坐看云起时
2楼2022-04-23 15:16:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

SJYyn

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2022-04-23 15:16:28
盐浓度太高了（磷酸盐 50mM， NaCl, 300mM，另外NaOH调节，整体盐浓度  >350 mM），而且不建议用磷酸盐。

建议 30 mM Tris-His, pH 8.0, 50 mM NaCl 试试， good luck

非常感谢您的回答！请问您的意思是我的洗脱液盐浓度太高导致蛋白可能失活了吗？还是说只要把我的蛋白换到您说的溶液里就好了？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2022-04-24 21:10:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by SJYyn at 2022-04-24 21:10:22
非常感谢您的回答！请问您的意思是我的洗脱液盐浓度太高导致蛋白可能失活了吗？还是说只要把我的蛋白换到您说的溶液里就好了？
...

蛋白没有失活，只是盐浓度太高，破坏了蛋白和核酸之间的互相作用。
赞一下(1人) 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
4楼2022-04-25 08:57:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

SJYyn

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by pennchem at 2022-04-25 08:57:39
蛋白没有失活，只是盐浓度太高，破坏了蛋白和核酸之间的互相作用。...

好的，那我就把它换到您说的溶液里试试，非常感谢您的指导！

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2022-04-25 11:05:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 SJYyn 的主题更新
51/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 266分，求材料冶金能源化工等调剂 +6 哇呼哼呼哼 2026-03-27 8/400 2026-03-28 07:15 by mmm just
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +15 荷包蛋hyj 2026-03-26 15/750 2026-03-28 04:13 by fmesaito
[考研] 315分求调剂 +7 26考研上岸版26 2026-03-26 7/350 2026-03-28 04:05 by fmesaito
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +3 小张zxy张 2026-03-26 5/250 2026-03-27 18:42 by 小张zxy张
[考研] 322求调剂 +4 旧吢 2026-03-24 4/200 2026-03-27 15:38 by 不吃魚的貓
[考研] 322求调剂 +4 我真的很想学习 2026-03-23 4/200 2026-03-27 13:51 by 杨杨杨紫
[考研] 299求调剂 +6 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 6/300 2026-03-27 12:43 by 果果妈咪
[考研] 304材料求调剂 +4 钟llll 2026-03-26 4/200 2026-03-27 03:42 by wxiongid
[考研] 求调剂 +5 芦lty 2026-03-25 6/300 2026-03-26 20:49 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂 +8 Auroracx 2026-03-22 8/400 2026-03-26 19:55 by 不吃魚的貓
[考研] 086000生物与医药292求调剂 +6 小小陈小小 2026-03-22 9/450 2026-03-26 15:58 by dick_runner
[考研] 材料277求调剂 +5 min3 2026-03-24 5/250 2026-03-26 15:13 by zzll406
[考研] 一志愿哈工大，085400，320，求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 材料专硕 335 分求调剂 +4 拒绝冷暴力 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:45 by haxia
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 材料调剂 +3 iwinso 2026-03-23 3/150 2026-03-25 11:29 by greychen00
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 12/600 2026-03-24 09:03 by jhybd
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭