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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教电泳图
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xihanlianz

银虫 (正式写手)

[交流] 请教电泳图

请大家帮我看看PCR电泳图，第一张图中有两条Marker。
模板取自植物基因组的DNA，跑电泳时有拖尾现象。

我的pcr体系：0.5ulDNA模板，0.3ul引物，2.0ul10*buffer, 1.5mM MgCl2, 0.15mMdNTPs, 1U taq酶。

循环参数：预变性94，7min，在80度暂停了5min。变性94度，30s，退火53度（上海生工给的Tm值），延伸72度，2min。总共40个循环。最后72度延伸7min。


我刚开始做PCR实验，所以都不太懂，请教大家我的实验中DNA有扩增吗？图中可以看出什么呢？（补充，由于PCR仪的缘故，在预变性后，实验停止，第二天的时候又重新拿原来的溶液做的实验）

我后来请教了一下别人，他给我的意见是我提取的DNA模板稀释不够，浓度太高了


第二张图是我把模板稀释了50倍后跑的条带。跑电泳把原来的90V调到了75V，觉得缓冲液少也，又倒了点，结果marker也模糊了，不知道是电压的影响还是缓冲液的影响？

[ Last edited by xihanlianz on 2009-9-8 at 23:13 ]
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1楼 2009-09-07 15:12:58
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
★
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我第一次知道PCR除了实验要求暂停一天再P呢，可能原因在这里吧。从电泳图来看很明显DNA全部降解了，原因我也不好说，我也是新手嘿嘿。
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2楼2009-09-07 16:03:42
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
不过还是有几条好带，这可能跟DNA的稳定性有关吧。我想问一下，你的PCR暂停后体系放在哪里了？
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3楼2009-09-07 16:05:06
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xihanlianz

银虫 (正式写手)
放4度冰箱放了一夜
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4楼2009-09-07 16:14:26
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zdf68

新虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没有目的片段，mark多大
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5楼2009-09-07 17:03:02
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tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
植物基因组的DNA  作为模板你稀释了多少倍？？
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6楼2009-09-07 17:07:37
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heismeng

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
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司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 9-7 19:30
模板是什么 cDNA? 是不是引物的问题啊 特异性不好？
挨着第二个MARKER的有一个band啊
我以前也遇到过这种情况 后来换了一种polymerase就好了
你再重做一次吧 尽量不要出现这次的情况 做好的反应液马上反应
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7楼2009-09-07 17:22:01
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)
模板太浓了吧
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8楼2009-09-07 19:44:52
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baiyidao

金虫 (小有名气)
DNA降解酶没有失活，再纯化几次吧。
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9楼2009-09-07 20:58:57
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xihanlianz

银虫 (正式写手)
我很想知道如果没有P出来，那么拖尾的是什么东西呢？
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10楼2009-09-08 20:05:07
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