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xihanlianz银虫 (正式写手)
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[交流]
请教电泳图
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请大家帮我看看PCR电泳图，第一张图中有两条Marker。 模板取自植物基因组的DNA，跑电泳时有拖尾现象。 我的pcr体系：0.5ulDNA模板，0.3ul引物，2.0ul10*buffer, 1.5mM MgCl2, 0.15mMdNTPs, 1U taq酶。 循环参数：预变性94，7min，在80度暂停了5min。变性94度，30s，退火53度（上海生工给的Tm值），延伸72度，2min。总共40个循环。最后72度延伸7min。 我刚开始做PCR实验，所以都不太懂，请教大家我的实验中DNA有扩增吗？图中可以看出什么呢？（补充，由于PCR仪的缘故，在预变性后，实验停止，第二天的时候又重新拿原来的溶液做的实验） 我后来请教了一下别人，他给我的意见是我提取的DNA模板稀释不够，浓度太高了 第二张图是我把模板稀释了50倍后跑的条带。跑电泳把原来的90V调到了75V，觉得缓冲液少也，又倒了点，结果marker也模糊了，不知道是电压的影响还是缓冲液的影响？ [ Last edited by xihanlianz on 2009-9-8 at 23:13 ] |
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