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xihanlianz

银虫 (正式写手)

[交流] 请教电泳图

请大家帮我看看PCR电泳图,第一张图中有两条Marker。
模板取自植物基因组的DNA,跑电泳时有拖尾现象。

我的pcr体系:0.5ulDNA模板,0.3ul引物,2.0ul10*buffer, 1.5mM MgCl2, 0.15mMdNTPs, 1U taq酶。

循环参数:预变性94,7min,在80度暂停了5min。变性94度,30s,退火53度(上海生工给的Tm值),延伸72度,2min。总共40个循环。最后72度延伸7min。


我刚开始做PCR实验,所以都不太懂,请教大家我的实验中DNA有扩增吗?图中可以看出什么呢?(补充,由于PCR仪的缘故,在预变性后,实验停止,第二天的时候又重新拿原来的溶液做的实验)

我后来请教了一下别人,他给我的意见是我提取的DNA模板稀释不够,浓度太高了


第二张图是我把模板稀释了50倍后跑的条带。跑电泳把原来的90V调到了75V,觉得缓冲液少也,又倒了点,结果marker也模糊了,不知道是电压的影响还是缓冲液的影响?

[ Last edited by xihanlianz on 2009-9-8 at 23:13 ]
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baiyidao

金虫 (小有名气)

DNA降解酶没有失活,再纯化几次吧。
9楼2009-09-07 20:58:57
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linxi8579

铜虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我第一次知道PCR除了实验要求暂停一天再P呢,可能原因在这里吧。从电泳图来看很明显DNA全部降解了,原因我也不好说,我也是新手嘿嘿。
2楼2009-09-07 16:03:42
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linxi8579

铜虫 (正式写手)

不过还是有几条好带,这可能跟DNA的稳定性有关吧。我想问一下,你的PCR暂停后体系放在哪里了?
3楼2009-09-07 16:05:06
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xihanlianz

银虫 (正式写手)

放4度冰箱放了一夜
4楼2009-09-07 16:14:26
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