应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » AKK菌粉复苏培养
91/1返回列表
查看: 3881  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

labinnah

金虫 (正式写手)

[求助] AKK菌粉复苏培养 已有2人参与

第一次做菌种复苏，还是厌氧菌，完全小白一个。

买的CICC的akk菌（相较于ATCC的便宜），按说明书要求配制了巧克力血平板，同时也按照部分文献参数配制了含L-苏氨酸及N-乙酰-D-氨基葡萄糖的改良BHI液体培养基。将菌粉用无菌生理盐水溶解后，各板/管加入50或100 uL菌液，平板涂布、试管混匀后分两批，分别放入37℃厌氧产气袋或厌氧培养箱中，到现在48h，只有一管BHI液体明显浑浊，还有飘絮一样的物质。其余未见菌生长

想请教大家：
1.菌粉冻干管之前一直按说明书要求4℃保存，但距现在使用时已有3个多月，菌是否可能已死亡？
2.说明书提示要用巧克力平板复苏，按配方溶解琼脂灭菌后，80-90℃加入无菌脱纤维羊血，继续酒精灯上摇匀5min左右，但发现琼脂内部还是存在细微的血凝块样物质（直径≤1mm），不像有些巧克力血平板那样质地均匀，这个巧克力血平板是不是做翻车了？做了2批都是这样
3.目前巧克力血平板表面未见菌落，但不知道有没有菌膜生成，背景色太深看不清楚。操作时加的50或100uL菌是不是太多了？导致没有单个菌落生成
4.说明书对时间说明有点笼统，只提到“菌种常规培养时间：细菌1-2天，酵母3天，霉菌5-7天，大型真菌 7-10天”，并未细化。看到文献提到用BHI培养基复苏三至七天的都有，我目前培养时间48h是不是短了，得继续等等看？但是万一等到7天都没有是不是就实锤翻车了？
5.唯一的BHI浑浊飘絮可能是污染吗？

先谢过各路大佬了，求大佬翻牌，谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2022-04-15 12:47:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

testobio

银虫 (小有名气)
我们用的 硫乙醇酸盐液体培养基  37°  厌氧

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

labinnah
泰斯拓生物www.testobio.com提供atcc，dsm，ccug等国外保藏中心菌株购买，联系电话15658058000
2楼2022-04-15 14:22:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

testobio

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做下镜检对比一下，菌株形态，或者送检16s测序

https://www.jcm.riken.jp/cgi-bin ... amp;CN=&DN=
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

labinnah
泰斯拓生物www.testobio.com提供atcc，dsm，ccug等国外保藏中心菌株购买，联系电话15658058000
3楼2022-04-15 14:28:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

明舟生物

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与，应助指数 +1
labinnah: 金币+200, ★★★★★最佳答案 2022-04-15 22:39:30
买的CICC的akk菌（相较于ATCC的便宜），按说明书要求配制了巧克力血平板，同时也按照部分文献参数配制了含L-苏氨酸及N-乙酰-D-氨基葡萄糖的改良BHI液体培养基。
/CICC的菌种还是比较靠谱的，培养基推荐用         硫乙醇酸盐流体培养基(FT)，试剂商有成品销售。刚开始不建议养这么难养的厌氧菌，先用金葡或者大肠练练手。

将菌粉用无菌生理盐水溶解后，各板/管加入50或100 uL菌液，平板涂布、试管混匀后分两批，分别放入37℃厌氧产气袋或厌氧培养箱中，到现在48h，
/AKK是严苛厌氧菌，所有接触的水溶液最好都做驱氧处理，溶解氧会杀死菌株

只有一管BHI液体明显浑浊，还有飘絮一样的物质。其余未见菌生长
/是否污染需要检测，从培养时间上看不会是真菌污染，可以取部分菌液出来，反正非厌氧环境中观察菌是否会继续增殖或者死亡。

想请教大家：
1.菌粉冻干管之前一直按说明书要求4℃保存，但距现在使用时已有3个多月，菌是否可能已死亡？
/冻干粉状态可以保存很久，十年八年死不了。

2.说明书提示要用巧克力平板复苏，按配方溶解琼脂灭菌后，80-90℃加入无菌脱纤维羊血，继续酒精灯上摇匀5min左右，但发现琼脂内部还是存在细微的血凝块样物质（直径≤1mm），不像有些巧克力血平板那样质地均匀，这个巧克力血平板是不是做翻车了？做了2批都是这样
/血平板可以找试剂商购买成品的，便宜还质量可靠，比自己做划算

3.目前巧克力血平板表面未见菌落，但不知道有没有菌膜生成，背景色太深看不清楚。操作时加的50或100uL菌是不是太多了？导致没有单个菌落生成
/涂布的话很难有单菌落生成，如果为了纯化，请划线来获得单菌落。

4.说明书对时间说明有点笼统，只提到“菌种常规培养时间：细菌1-2天，酵母3天，霉菌5-7天，大型真菌 7-10天”，并未细化。看到文献提到用BHI培养基复苏三至七天的都有，我目前培养时间48h是不是短了，得继续等等看？但是万一等到7天都没有是不是就实锤翻车了？
/AKK是细菌，正常48小时就长好了，除非生长条件不合适。可以再等等

5.唯一的BHI浑浊飘絮可能是污染吗？
/是否污染需要检测，从培养时间上看不会是真菌污染，可以取部分菌液出来，反正非厌氧环境中观察菌是否会继续增殖或者死亡。
赞一下(3人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

labinnah
4楼2022-04-15 14:57:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

labinnah

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by testobio at 2022-04-15 14:22:08
我们用的 硫乙醇酸盐液体培养基  37°  厌氧

谢谢，我买点试试看，浓度一般配多少呢？
赞一下 回复此楼
5楼2022-04-15 22:35:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

labinnah

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by testobio at 2022-04-15 14:28:58
做下镜检对比一下，菌株形态，或者送检16s测序

https://www.jcm.riken.jp/cgi-bin/jcm/jcm_keyword?AN=Akkermansia&BN=muciniphila&CN=&DN=

谢谢，明早72h时拿出来传代试试，顺便染个色看看
赞一下 回复此楼
6楼2022-04-15 22:41:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

labinnah

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 明舟生物 at 2022-04-15 14:57:58
买的CICC的akk菌（相较于ATCC的便宜），按说明书要求配制了巧克力血平板，同时也按照部分文献参数配制了含L-苏氨酸及N-乙酰-D-氨基葡萄糖的改良BHI液体培养基。
/CICC的菌种还是比较靠谱的，培养基推荐用         硫乙醇酸 ...

多谢大佬，还有个疑问请教一下，to Answer #4：/AKK是细菌，正常48小时就长好了，除非生长条件不合适。可以再等等。

假如细菌48h长好了，我7d后才打开，留给我的是不是只有尸体了？
赞一下 回复此楼
7楼2022-04-15 22:59:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

明舟生物

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by labinnah at 2022-04-15 22:59:49
多谢大佬，还有个疑问请教一下，to Answer #4：/AKK是细菌，正常48小时就长好了，除非生长条件不合适。可以再等等。

假如细菌48h长好了，我7d后才打开，留给我的是不是只有尸体了？...

不会的，细菌在营养不够生长的时候会进入半休眠状态，不再增殖，停止生长，但是不会那么容易死亡，除非特殊的菌，比如 肺炎链球菌 ，这个菌不能培养超过24小时，超过就开始自杀。。。。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

labinnah
8楼2022-04-18 09:27:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

labinnah

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 明舟生物 at 2022-04-18 09:27:51
不会的，细菌在营养不够生长的时候会进入半休眠状态，不再增殖，停止生长，但是不会那么容易死亡，除非特殊的菌，比如 肺炎链球菌 ，这个菌不能培养超过24小时，超过就开始自杀。。。。...

多谢多谢
回复此楼
9楼2022-04-18 12:56:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 labinnah 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿浙大生物325分求调剂 +4 zysheng 2026-04-12 4/200 2026-04-12 13:46 by 段伟艳
[考研] 电气专硕320求调剂 +6 小麻子111 2026-04-10 6/300 2026-04-12 10:54 by lemon6009
[考研] 347求调剂 +4 mhyqyy 2026-04-06 4/200 2026-04-12 02:27 by 秋豆菜芽
[考研] 274求调剂求调剂 +11 Jachenbingoo 2026-04-06 14/700 2026-04-11 11:37 by 紫曦紫棋
[考研] 269电子信息求调剂，可转专业 +11 独酌wl 2026-04-06 11/550 2026-04-11 11:12 by 逆水乘风
[考研] 0854调剂 +4 长弓傲 2026-04-09 4/200 2026-04-11 09:18 by 猪会飞
[考研] 085404 298分求调剂 +10 呼啦呼啦呼呼呼 2026-04-10 11/550 2026-04-10 16:44 by wangy0907
[考研] 一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂 +27 努力奋斗112 2026-04-07 30/1500 2026-04-10 15:06 by Kilig0317
[考研] 材料调剂 +5 hzhahg 2026-04-06 5/250 2026-04-10 10:10 by may_新宇
[考研] 083200 初试305分 求调剂 暂不考虑跨专业 +15 Claireyyyy 2026-04-09 15/750 2026-04-09 16:11 by zhuimr
[考研] 化学工程与技术专业一志愿哈工程 291分B区 国家级大创负责人 有一作论文 +13 Emmy~ 2026-04-09 13/650 2026-04-09 14:47 by only周
[考研] 283电子信息求调剂 +4 三石WL 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:21 by wp06
[考研] 281求调剂 +10 椰子蘑菇 2026-04-06 10/500 2026-04-08 11:43 by zzucheup
[考研] 求调剂 +11 wwwwabcde 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:16 by JourneyLucky
[考研] 344求调剂 +11 魏子per 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:01 by JourneyLucky
[考研] 0854电子信息319求调剂（接受跨专业调剂） +5 星星不眨眼喽 2026-04-05 6/300 2026-04-07 22:16 by hemengdong
[考研] 22408 调剂材料 +7 我叫ez 2026-04-06 8/400 2026-04-07 17:12 by 蓝云思雨
[考研] 312求调剂 +4 LR6 2026-04-06 4/200 2026-04-07 08:42 by jp9609
[考研] 材料调剂 +5 小刘同学吖吖 2026-04-06 5/250 2026-04-06 18:34 by sherry_1901
[考研] 285求调剂 +5 mapmath 2026-04-06 6/300 2026-04-06 17:18 by 蓝云思雨
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭