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jack6335铁杆木虫 (正式写手)
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[交流]
请教毕赤酵母电转化问题
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| 我最近在做毕赤酵母表达，质粒已经重组好，用的是pPIC9K，重组质粒大小约11KB，转化的毕赤酵母是GS115，我先是接种毕赤酵母到2mLYPD培养基中，等到OD600到1.3时，离心，加无菌水洗两次，再用山梨醇洗一次，最后加1mL山梨醇，然后从中取80微升与10微升线性化重组质粒混合，转化条件是1.99kV，时间6.0ms，电击两次，然后加山梨醇，涂MD平板，可是平板上一直未长菌落，不知是何原因，请高人指点！ |
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4楼2009-09-04 17:19:56