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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 求助克隆基因扩增问题

克隆基因时2600bp的片段用Taq扩很亮,用高保真酶Kod,pfu均没扩出来,反应体系按推荐的和别人扩出来过的体系,两种酶均作过退火温度梯度试验,可是都没有带。大家有遇到过这种情况么?怎么解决的呢?谢谢,谢谢
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路漫漫其修远兮,吾将上下而求索
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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 9-5 14:53
Taq酶是目前最稳定的酶了,也是用的最广的酶其他的或多或少都有点问题,还是用Taq酶吧!
砖石王老三!!!
14楼2009-09-05 14:33:06
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spiderboy

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
能不能再提供点信息,比如,引物TM值,克隆用的载体,用TAQ有没有重扩试下等
2楼2009-09-03 19:03:54
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wangxiaoli8216

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
或许楼主可以考虑Taq与PFU混合使用
3楼2009-09-03 20:21:39
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
pfu酶活要比taq差,pcr反应体系和循环体系要重新摸索。
Thank-you,so-blue.
4楼2009-09-03 21:45:53
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