| 查看: 972 | 回复: 2 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者云之遥V将赠送您 6 个金币 | ||
[求助]
毕赤酵母pGAPZαA转化染菌问题 已有1人参与
|
||
|
求助毕赤酵母转化过程中的问题，使用的是pGAPZαA质粒，Zeocin浓度100ug/ml，感受态使用山梨醇处理制备而成，现做现用，转化后对照平板总是长菌，不知道原因，师姐就没遇到过类似问题，本人怀疑可能有以下几个可能原因： 1.抗生素浓度不够，但师姐同样的质粒50ug/ml都没出现过这种问题！！！ 2.电转时加菌液过多，自己加了200ul，文献都是100ul，导致 转化效率不够，但为什么会长菌呢？ 3.离心涂布时留菌液太多，留100ul和200ul，我都试过，100ul涂布比较干，200ul比较湿润，难道这也影响？ 4.100ml菌液，od1.3左右，感受态制备4，5管，难道说菌太多抗生素无法抑制？之前做过分装10管的话对照不会长菌，但会不会影响转化效率，而且别人正常分装4,5管也没事呀，哭了。。。 求助大神帮忙解决，很平常的转化一直困扰我很久了。  |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有161人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
澜沧的爱
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 146.3
- 散金: 230
- 帖子: 197
- 在线: 13.8小时
- 虫号: 4311016
- 注册: 2015-12-25
- 专业: 生物大分子结构与功能
|
一些建议： 1.转化用菌株验证一下，是不是染菌了，自带了zeocin抗性 2. 电转杯污染，重新处理电转杯，重新转化。(电转过程，比如菌液分装量，涂布之类的，对实验结果一般不会有太大的影响的) 祝好！ 发自小木虫Android客户端 |
2楼2022-03-16 11:00:14
3楼2022-03-23 22:50:24
