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gss8285

铜虫 (小有名气)

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[交流] 请教流式细胞术测全血中干细胞个数！已有1人参与

由于本人是学化学的，想测定一下给药前后外周血中内皮祖细胞含量的变化。
设计了个实验方案，有错误和不足之处还请各位高手指教：
1）抽兔血，肝素抗凝
2）加入红细胞裂解液溶解红细胞，溶血15-20min，PBS洗两次
3) 加入一抗，孵育30min，PBS洗一次，1500rpm，离心3min,弃上清
4）加入荧光标记二抗，室温避光20-30min,PBS洗一次，1500rpm，离心3min，弃上清
5)加入适量PBS，上机检测（若不能及时上级检测，可加1ml 1%多聚甲醛固定，可放置一周）

几个问题：
1）为什么要加裂解液溶解红细胞
2）PBS洗弃上清液的时候，应弃掉多少，怎么掌控
3）流式细胞仪检测细胞个数时，细胞最少多少能检测到

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