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pcr一直做不出来,在就毕不了业了,救救孩子吧
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pcr一直做不出来,刚开始是以为退火温度的原因,但也没做出来,后面换了模板也没做出来,跑出来的都是这样的。
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2022-03-06 09:35:30
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
换引物,前端几个优化一下也没关系,连在载体上,用引物再扩就好了。
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17楼
2022-03-06 17:23:37
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yugege2009
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换个引物试试
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2022-03-06 11:12:33
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shuaibia6
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
首先楼上说的很对你引物不行,其次你的模板浓度太高了,看亮度你用的质粒吧,质粒稀释到10-3ng/ul就行,你觉得低可以10-2.最后建议下次你把你的marker大小介绍一下。
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18楼
2022-03-07 08:53:43
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elmanbio
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1 跑电泳确定你的模板有没问题,不要用分光光度计作为测试标准,用电泳
2 看看你的PCR 产物里面的GC含量怎么样?是不是过于高,如果是可以换用高GC buffer测试
3 引物设计方面,看看是不是有问题,做个退火梯度看看
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19楼
2022-03-07 09:44:04
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hanxiaominhu
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
体系中的所有部分都挨个换成能出的,包括水,酶,甚至,让别人做一次,用别人的引物模板做一次。
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20楼
2022-03-07 09:49:02
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18楼
:
Originally posted by
shuaibia6
at 2022-03-07 08:53:43
首先楼上说的很对你引物不行,其次你的模板浓度太高了,看亮度你用的质粒吧,质粒稀释到10-3ng/ul就行,你觉得低可以10-2.最后建议下次你把你的marker大小介绍一下。
我是用cDNA为模板
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21楼
2022-03-24 09:19:54
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新虫
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17楼
:
Originally posted by
爆炒小木虫
at 2022-03-06 17:23:37
换引物,前端几个优化一下也没关系,连在载体上,用引物再扩就好了。
那样会不会容易突变呀
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22楼
2022-03-25 09:31:29
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muchong888
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tzynew
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