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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr一直做不出来，在就毕不了业了，救救孩子吧
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新虫 (初入文坛)
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pcr一直做不出来，在就毕不了业了，救救孩子吧
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pcr一直做不出来，刚开始是以为退火温度的原因，但也没做出来，后面换了模板也没做出来，跑出来的都是这样的。

pcr一直做不出来，在就毕不了业了，救救孩子吧


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1楼 2022-03-06 09:35:30
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爆炒小木虫

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
换引物，前端几个优化一下也没关系，连在载体上，用引物再扩就好了。

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17楼2022-03-06 17:23:37
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yugege2009

至尊木虫 (知名作家)
换个引物试试

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15楼2022-03-06 11:12:33
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shuaibia6

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
首先楼上说的很对你引物不行，其次你的模板浓度太高了，看亮度你用的质粒吧，质粒稀释到10-3ng/ul就行，你觉得低可以10-2.最后建议下次你把你的marker大小介绍一下。
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18楼2022-03-07 08:53:43
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elmanbio

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1     跑电泳确定你的模板有没问题，不要用分光光度计作为测试标准，用电泳
2     看看你的PCR 产物里面的GC含量怎么样？是不是过于高，如果是可以换用高GC buffer测试
3     引物设计方面，看看是不是有问题，做个退火梯度看看
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19楼2022-03-07 09:44:04
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
体系中的所有部分都挨个换成能出的，包括水，酶，甚至，让别人做一次，用别人的引物模板做一次。

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20楼2022-03-07 09:49:02
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新虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by shuaibia6 at 2022-03-07 08:53:43
首先楼上说的很对你引物不行，其次你的模板浓度太高了，看亮度你用的质粒吧，质粒稀释到10-3ng/ul就行，你觉得低可以10-2.最后建议下次你把你的marker大小介绍一下。

我是用cDNA为模板

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21楼2022-03-24 09:19:54
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新虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 爆炒小木虫 at 2022-03-06 17:23:37
换引物，前端几个优化一下也没关系，连在载体上，用引物再扩就好了。

那样会不会容易突变呀

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22楼2022-03-25 09:31:29
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muchong8882楼
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tzynew3楼
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wangyanlq116楼
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kshdd7楼
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wy120788楼
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37132619989楼
2022-03-06 10:19   回复  
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可乐乐茶10楼
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wyj97011楼
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北冥有鱼？12楼
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芬芬仔13楼
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yugege200914楼
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biosci16楼
2022-03-06 13:00   回复  
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