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求助：包涵体纯化具体步骤
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因为查到的关于包涵体纯化的资料都是介绍性的，只是指明在这一步要做什么，用哪个试剂，为什么用，却没有详细的加多少量，注意什么之类的。 所以很想求助一份详细的protocol，可以不用介绍原理，只有步骤即可。包涵体，快让人抓狂了。不好做。 [ Last edited by 350784478 on 2009-9-3 at 08:57 ] |
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luo_dong(金币+2,VIP+0): 9-7 15:52
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其实很简单，IBs先用包涵体洗涤液清洗几次，然后用变性液溶解（至于是8M尿素还是4M，还是盐酸胍，都要视你的蛋白性质而定，有的4M尿素就可以溶解，要看具体情况），至于加多少液体，当然能够保证全部溶解就可以了，也没有定量。 变性完后，就是纯化，亲和、离子、输水都可以选择。具体protocol参考amersham的handbook，本论坛有下。 复性的话，如果没有必要，比如用作免疫，就不要复性了，那是瞎折腾，费时费力。当然如果需要，也没有说的那么难，这个方面可以去genecool论坛看看，蛋白质版里有不少好文献和帖子。蛋白质复性率也要看蛋白性质，有的好复性，复性率可以达到80%以上，有的就很难，但一般还是会高于20%的，通常的复性率还是在50%到70%之间。 祝实验顺利。 |
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