| 查看: 544 | 回复: 4 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
求助：包涵体纯化具体步骤
|
|||
|
因为查到的关于包涵体纯化的资料都是介绍性的，只是指明在这一步要做什么，用哪个试剂，为什么用，却没有详细的加多少量，注意什么之类的。 所以很想求助一份详细的protocol，可以不用介绍原理，只有步骤即可。包涵体，快让人抓狂了。不好做。 [ Last edited by 350784478 on 2009-9-3 at 08:57 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
面上可以超过30页吧？
已经有13人回复
-
网上报道青年教师午睡中猝死、熬夜猝死的越来越多，主要哪些原因引起的？
已经有10人回复
-
为什么中国大学工科教授们水了那么多所谓的顶会顶刊，但还是做不出宇树机器人？
已经有13人回复
-
什么是人一生最重要的？
已经有8人回复
-
版面费该交吗
已经有17人回复
-
体制内长辈说体制内绝大部分一辈子在底层，如同你们一样大部分普通教师忙且收入低
已经有19人回复
-
【博士招生】太原理工大学2026化工博士
已经有8人回复
-
280求调剂
已经有4人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
bioxixi
木虫 (著名写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 2254.6
- 散金: 55
- 红花: 1
- 帖子: 1080
- 在线: 89.5小时
- 虫号: 662656
- 注册: 2008-11-26
- 性别: MM
- 专业: 细胞生物学
2楼2009-09-03 16:27:40
3楼2009-09-05 08:49:40
snoopyzxx
木虫 (著名写手)
- BioEPI: 4
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 3232.6
- 散金: 1266
- 红花: 43
- 帖子: 2256
- 在线: 276.6小时
- 虫号: 548497
- 注册: 2008-04-19
- 性别: MM
- 专业: 全球变化生态学
★ ★
luo_dong(金币+2,VIP+0): 9-7 15:52
luo_dong(金币+2,VIP+0): 9-7 15:52
|
其实很简单，IBs先用包涵体洗涤液清洗几次，然后用变性液溶解（至于是8M尿素还是4M，还是盐酸胍，都要视你的蛋白性质而定，有的4M尿素就可以溶解，要看具体情况），至于加多少液体，当然能够保证全部溶解就可以了，也没有定量。 变性完后，就是纯化，亲和、离子、输水都可以选择。具体protocol参考amersham的handbook，本论坛有下。 复性的话，如果没有必要，比如用作免疫，就不要复性了，那是瞎折腾，费时费力。当然如果需要，也没有说的那么难，这个方面可以去genecool论坛看看，蛋白质版里有不少好文献和帖子。蛋白质复性率也要看蛋白性质，有的好复性，复性率可以达到80%以上，有的就很难，但一般还是会高于20%的，通常的复性率还是在50%到70%之间。 祝实验顺利。 |
4楼2009-09-05 10:39:36
snoopyzxx
木虫 (著名写手)
- BioEPI: 4
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 3232.6
- 散金: 1266
- 红花: 43
- 帖子: 2256
- 在线: 276.6小时
- 虫号: 548497
- 注册: 2008-04-19
- 性别: MM
- 专业: 全球变化生态学
5楼2009-09-05 10:41:24