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lili1130

[交流] 急需帮助

最近做片段克隆遇到了很怪的问题。
一：用的是TAKARA克隆试剂盒做蓝白斑筛选，筛选培养里加了适宜浓度的氨苄，一般的平板过夜就能张出来东西，但是我的板子长了将近24个小时，这是为什么呢？
二：筛选培养基长出来蓝白斑以后，挑菌到含有氨苄的LB液体培养基中摇菌过夜，准备做菌液PCR，挑了20个白菌落，过夜后发现没有一支菌液管里有细菌繁殖。培养基是正常的，氨苄的浓度加的也不是很高，适宜浓度。请问，这会是什么原因呢？
由于找不到原因，心里很是郁闷，请各位大侠帮帮忙，本人不盛感激
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1楼 2009-09-01 09:16:08
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yangym1123

木虫 (小有名气)
★
lili1130(金币+1):谢谢参与
1.是不是有的感受态细胞本身长的慢呢？

2.筛选出的白色单菌落是不是假阳性呢？

3.感受态细胞有没有问题啊？
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2楼2009-09-01 09:19:25
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kitty8682

金虫 (正式写手)
★
lili1130(金币+1):谢谢参与
一般最多长16h，时间再长长的就是假阳性的了
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3楼2009-09-01 09:43:31
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
★
lili1130(金币+1):谢谢参与
应该是目的基因没连上去吧 出现的都是假阳性的菌落
蓝白斑筛选肉眼本来就很难判断的
加大抗生素浓度来铺平板  再试试
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
4楼2009-09-01 09:43:53
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695

木虫 (职业作家)
★
lili1130(金币+1):谢谢参与
一般最多长16h，时间再长长的就是假阳性的了
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5楼2009-09-01 17:44:10
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cato8163

银虫 (正式写手)
★
lili1130(金币+1):谢谢参与
先回答第一个问题:可能是感受态细胞问题；一个就是假阳性。
问题二：极有可能是你的LB培养基中的抗生素种类和浓度加错了。
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6楼2009-09-01 20:13:45
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lili1130

谢谢各位的意见
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7楼2009-09-02 15:27:58
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zjwang

木虫 (正式写手)
★
lili1130(金币+1):谢谢参与
24小时才出来的菌是假阳性的
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8楼2009-09-02 17:50:04
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zhongzsj

金虫 (著名写手)

快乐家族---幽幽
★
lili1130(金币+1):谢谢参与
额，我诱变后的菌也没长起来，也真愁着怎回事呢，上次还长得好好的
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不矢口亻十么日寸候亻奄口斤言兑言仑土云有辶寸氵虑敏感字节白勺言兑氵去于是亻奄学会了扌斥字后来亻奄米青礻申分歹刂了。
9楼2009-09-02 18:19:21
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jinger_qd

木虫 (正式写手)
★
lili1130(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by zjwang at 2009-9-2 17:50:
24小时才出来的菌是假阳性的

同意！用这样的白斑再去加过抗生素的液体培养是长不出来的。
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10楼2009-09-02 19:31:55
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