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lili1130

[交流] 急需帮助

最近做片段克隆遇到了很怪的问题。
一:用的是TAKARA克隆试剂盒做蓝白斑筛选,筛选培养里加了适宜浓度的氨苄,一般的平板过夜就能张出来东西,但是我的板子长了将近24个小时,这是为什么呢?
二:筛选培养基长出来蓝白斑以后,挑菌到含有氨苄的LB液体培养基中摇菌过夜,准备做菌液PCR,挑了20个白菌落,过夜后发现没有一支菌液管里有细菌繁殖。培养基是正常的,氨苄的浓度加的也不是很高,适宜浓度。请问,这会是什么原因呢?
由于找不到原因,心里很是郁闷,请各位大侠帮帮忙,本人不盛感激
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cato8163

银虫 (正式写手)


lili1130(金币+1):谢谢参与
先回答第一个问题:可能是感受态细胞问题;一个就是假阳性。
问题二:极有可能是你的LB培养基中的抗生素种类和浓度加错了。
6楼2009-09-01 20:13:45
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yangym1123

木虫 (小有名气)


lili1130(金币+1):谢谢参与
1.是不是有的感受态细胞本身长的慢呢?

2.筛选出的白色单菌落是不是假阳性呢?

3.感受态细胞有没有问题啊?
2楼2009-09-01 09:19:25
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kitty8682

金虫 (正式写手)


lili1130(金币+1):谢谢参与
一般最多长16h,时间再长长的就是假阳性的了
3楼2009-09-01 09:43:31
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由,人权之基。

优秀版主


lili1130(金币+1):谢谢参与
应该是目的基因没连上去吧 出现的都是假阳性的菌落
蓝白斑筛选肉眼本来就很难判断的
加大抗生素浓度来铺平板  再试试
从小就学习鲁迅,直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助,却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊!
4楼2009-09-01 09:43:53
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