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lili1130

[交流] 急需帮助

最近做片段克隆遇到了很怪的问题。
一：用的是TAKARA克隆试剂盒做蓝白斑筛选，筛选培养里加了适宜浓度的氨苄，一般的平板过夜就能张出来东西，但是我的板子长了将近24个小时，这是为什么呢？
二：筛选培养基长出来蓝白斑以后，挑菌到含有氨苄的LB液体培养基中摇菌过夜，准备做菌液PCR，挑了20个白菌落，过夜后发现没有一支菌液管里有细菌繁殖。培养基是正常的，氨苄的浓度加的也不是很高，适宜浓度。请问，这会是什么原因呢？
由于找不到原因，心里很是郁闷，请各位大侠帮帮忙，本人不盛感激
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1楼 2009-09-01 09:16:08
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jinger_qd

木虫 (正式写手)
★
lili1130(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by zjwang at 2009-9-2 17:50:
24小时才出来的菌是假阳性的

同意！用这样的白斑再去加过抗生素的液体培养是长不出来的。
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10楼2009-09-02 19:31:55
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yangym1123

木虫 (小有名气)
★
lili1130(金币+1):谢谢参与
1.是不是有的感受态细胞本身长的慢呢？

2.筛选出的白色单菌落是不是假阳性呢？

3.感受态细胞有没有问题啊？
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2楼2009-09-01 09:19:25
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kitty8682

金虫 (正式写手)
★
lili1130(金币+1):谢谢参与
一般最多长16h，时间再长长的就是假阳性的了
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3楼2009-09-01 09:43:31
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
★
lili1130(金币+1):谢谢参与
应该是目的基因没连上去吧 出现的都是假阳性的菌落
蓝白斑筛选肉眼本来就很难判断的
加大抗生素浓度来铺平板  再试试
赞一下(1人) 回复此楼
从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
4楼2009-09-01 09:43:53
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