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yghboy168

银虫 (小有名气)

[交流] HindIII酶切过夜后什么也没有了

质粒被HindIII酶切后就没有条带了
见附件。这是什么原因?质粒跑过胶浓度很大。我的是10微体系:6.5质粒提取物,2微BSA,1微 10×BUFFER,0.5微酶。10微全部加入胶孔。我用的是上海博彩的酶,就是俄罗斯sibenzyme西伯公司的。大家有没有用过?难到酶有问题?
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hungover

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
楼主最好说清楚一些,从什么菌株提取的质粒,有些表达菌株提取出的质粒不是很稳定!溶解在buffer中易降解。
2楼2009-08-31 09:54:11
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xinlai

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
做个空白对照看看质粒过夜的效果吧
3楼2009-08-31 10:35:22
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jessica533

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
没用过这个公司的,可以同时用HindIII切一下另一种质粒,验证一下酶是否好用
把忧愁微掉,将快乐积起。
4楼2009-08-31 14:44:46
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695

木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by xinlai at 2009-8-31 10:35:
做个空白对照看看质粒过夜的效果吧

对照很重要的
5楼2009-08-31 15:08:50
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shensc727

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这个电泳图里没有跑你做酶切前的质粒吗?这个一定 要跑的,作为空白对照!
Hingd3 需要加BSA吗?
你切的片段是多大?质粒是多大?
说的详细点
6楼2009-08-31 19:01:24
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yghboy168

银虫 (小有名气)

呵呵谢谢大家支持。我这个是提取的T载体,北京全式金的pEASY-T1 T载体,想单酶切验证是否已克隆目的基因。大家提的很好,我以后做个对照。想问问大家有没有这个可能:这HINDIII不纯,有DNA酶或外切酶活性?大家有没有遇到过,酶切后什么都没有了的现象?
眼内有尘三界窄,心头无事一床宽!
7楼2009-09-01 10:38:13
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VVWW

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我的看法也是看酶切之前是否提出来质粒,以及浓度情况;再做没切实验
8楼2009-09-01 12:36:38
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heismeng

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你做个colony PCR不就知道了吗
而且你的图我也看不懂 上面不是有一个BAND吗
先做colony PCR
然后直接测序就可以了
实在想做digestion 做double digestion vector和insert上个找一个酶切位点
9楼2009-09-01 13:02:45
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