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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » HindIII酶切过夜后什么也没有了
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yghboy168

银虫 (小有名气)

[交流] HindIII酶切过夜后什么也没有了

质粒被HindIII酶切后就没有条带了
见附件。这是什么原因？质粒跑过胶浓度很大。我的是10微体系：6.5质粒提取物，2微BSA，1微 10×BUFFER，0.5微酶。10微全部加入胶孔。我用的是上海博彩的酶，就是俄罗斯sibenzyme西伯公司的。大家有没有用过？难到酶有问题？
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眼内有尘三界窄，心头无事一床宽！
1楼 2009-08-31 09:27:34
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hungover

金虫 (小有名气)
★
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楼主最好说清楚一些，从什么菌株提取的质粒，有些表达菌株提取出的质粒不是很稳定！溶解在buffer中易降解。
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2楼2009-08-31 09:54:11
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xinlai

银虫 (小有名气)
★
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做个空白对照看看质粒过夜的效果吧
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3楼2009-08-31 10:35:22
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jessica533

新虫 (小有名气)
★
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没用过这个公司的，可以同时用HindIII切一下另一种质粒，验证一下酶是否好用
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把忧愁微掉，将快乐积起。
4楼2009-08-31 14:44:46
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695

木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by xinlai at 2009-8-31 10:35:
做个空白对照看看质粒过夜的效果吧

对照很重要的
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5楼2009-08-31 15:08:50
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shensc727

金虫 (小有名气)
★
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这个电泳图里没有跑你做酶切前的质粒吗？这个一定 要跑的，作为空白对照！
Hingd3 需要加BSA吗？
你切的片段是多大？质粒是多大？
说的详细点
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6楼2009-08-31 19:01:24
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yghboy168

银虫 (小有名气)
呵呵谢谢大家支持。我这个是提取的T载体，北京全式金的pEASY-T1 T载体，想单酶切验证是否已克隆目的基因。大家提的很好，我以后做个对照。想问问大家有没有这个可能：这HINDIII不纯，有DNA酶或外切酶活性？大家有没有遇到过，酶切后什么都没有了的现象？
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眼内有尘三界窄，心头无事一床宽！
7楼2009-09-01 10:38:13
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VVWW

新虫 (小有名气)
★
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我的看法也是看酶切之前是否提出来质粒，以及浓度情况；再做没切实验
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8楼2009-09-01 12:36:38
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heismeng

金虫 (小有名气)
★
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你做个colony PCR不就知道了吗
而且你的图我也看不懂 上面不是有一个BAND吗
先做colony PCR
然后直接测序就可以了
实在想做digestion 做double digestion vector和insert上个找一个酶切位点
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9楼2009-09-01 13:02:45
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