| 查看: 3226 | 回复: 12 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
救救孩子，PCR做了半年了没结果 已有7人参与
|
|||
|
我首先提取螨虫体的基因组DNA，特异性扩增螨虫基因组中一段稳定遗传且保守的序列ITS2，扩增之后送PCR产物测序，然后比对测序结果得到相似度（大于90%），以这种方法来检定虫种的纯度。 我有400个虫体样本需要检定，每次检定到100多个虫种时，扩增的条带会出现引物二聚体，然后引物二聚体越来越严重，最后目的条带消失，出现涂抹带现象。本来认为是引物降解的原因，我合成了新的引物，也没有用。提取DNA我们使用的是索莱宝的动物基因组提取试剂盒，由于螨虫极小，所以提取的浓度只有不到3ng/μl，尝试了其他的提取方式但是都没有解决。但是在实验的前100虫体都很顺利，之后条带就逐渐消失。最后我直接重新设计了引物，扩增出来的条带及其明亮单一，用以前做不出来的DNA作为模板也是单一明亮的条带。由于重新设计了引物所以400个样本的检定又要重新开始，奇怪的地方又出现了，检定了一部分时之后又出现了同样的问题。之后我又设计了第三对引物，检定了一部分时之后同样的问题又出现了。 总之只要我重新设计引物扩增条带就很好，但是使用一段时间后就不稳定了。就算重新合成新的引物也是如此，除非重新设计新序列的引物。   发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有189人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
pennchem
专家顾问 (正式写手)
-
专家经验: +21 - MolEPI: 1
- 应助: 297 (大学生)
- 金币: 10404.5
- 散金: 65
- 红花: 28
- 帖子: 596
- 在线: 1099.3小时
- 虫号: 2139205
- 注册: 2012-11-21
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学
拟南芥i
4楼2022-02-23 18:28:10
shuaibia6
金虫 (小有名气)
- 应助: 40 (小学生)
- 金币: 1309.9
- 散金: 5
- 帖子: 123
- 在线: 214.5小时
- 虫号: 27620688
- 注册: 2021-10-26
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2022-02-23 16:58:39
3楼2022-02-23 17:28:17
5楼2022-02-23 21:42:12