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x8q4h11

木虫 (小有名气)

[交流] 毕赤酵母做宿主表达的基本过程

大家好,我最近想将植物中的一段基因在毕赤酵母中表达,以前用过大肠杆菌做宿主,对毕赤酵母的操作不了解;请做过的虫友介绍一下基本过程,多谢!
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sun22741592

金虫 (小有名气)


x8q4h11(金币+1,VIP+0): 9-2 12:20
我用pichia系统表达过乙肝病毒的一个基因,用的试剂什么的都是invitrogene的,结果SDSPAGE,western都没有特异条带。表达效果不咋地
2楼2009-09-01 14:51:50
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kitty8682

金虫 (正式写手)


x8q4h11(金币+1,VIP+0): 9-2 12:21
我用毕赤酵母表达系统,将目的基因连上表达载体,电转到酵母细胞,表达效果还不错
3楼2009-09-02 08:01:30
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x8q4h11

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by kitty8682 at 2009-9-2 08:01:
我用毕赤酵母表达系统,将目的基因连上表达载体,电转到酵母细胞,表达效果还不错

连到表达载体后,单切线性化也是采用胶回收试剂盒回收此片段再转化吗?我看到操作手册上写着乙醇沉淀之类的,不太明白怎么操作,望指教。谢谢
4楼2009-09-03 09:03:32
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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)

线性化后你可以用乙醇沉淀法纯化目的片段,也可以用试剂盒,有时线性化后还要对目的基因磷酸化,以提高转化效率。
砖石王老三!!!
5楼2009-09-05 21:49:59
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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
x8q4h11(金币+2,VIP+0):谢谢 9-6 12:56
线性化后你可以用乙醇沉淀法纯化目的片段,也可以用试剂盒,有时线性化后还要对目的基因磷酸化,以提高转化效率。
砖石王老三!!!
6楼2009-09-05 21:50:18
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