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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 毕赤酵母做宿主表达的基本过程
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x8q4h11

木虫 (小有名气)

[交流] 毕赤酵母做宿主表达的基本过程

大家好，我最近想将植物中的一段基因在毕赤酵母中表达，以前用过大肠杆菌做宿主，对毕赤酵母的操作不了解；请做过的虫友介绍一下基本过程，多谢！
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1楼 2009-08-29 12:20:12
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sun22741592

金虫 (小有名气)
★
x8q4h11(金币+1,VIP+0): 9-2 12:20
我用pichia系统表达过乙肝病毒的一个基因，用的试剂什么的都是invitrogene的，结果SDSPAGE,western都没有特异条带。表达效果不咋地
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2楼2009-09-01 14:51:50
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kitty8682

金虫 (正式写手)
★
x8q4h11(金币+1,VIP+0): 9-2 12:21
我用毕赤酵母表达系统，将目的基因连上表达载体，电转到酵母细胞，表达效果还不错
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3楼2009-09-02 08:01:30
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x8q4h11

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by kitty8682 at 2009-9-2 08:01:
我用毕赤酵母表达系统，将目的基因连上表达载体，电转到酵母细胞，表达效果还不错

连到表达载体后，单切线性化也是采用胶回收试剂盒回收此片段再转化吗？我看到操作手册上写着乙醇沉淀之类的，不太明白怎么操作，望指教。谢谢
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4楼2009-09-03 09:03:32
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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)
线性化后你可以用乙醇沉淀法纯化目的片段，也可以用试剂盒，有时线性化后还要对目的基因磷酸化，以提高转化效率。
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砖石王老三！！！
5楼2009-09-05 21:49:59
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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
x8q4h11(金币+2,VIP+0):谢谢 9-6 12:56
线性化后你可以用乙醇沉淀法纯化目的片段，也可以用试剂盒，有时线性化后还要对目的基因磷酸化，以提高转化效率。
赞一下(2人) 回复此楼
砖石王老三！！！
6楼2009-09-05 21:50:18
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