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wandouGGGM

新虫 (初入文坛)

[求助] GFP融合蛋白定位

本来想做一个液泡定位基因,在洋葱叶表皮细胞里用农杆菌转化法,转化了一个带有液泡膜水通道蛋白的GFP融合蛋白基因,在早先已经有不少文献用这个Tip基因作为液泡膜定位信号了,但是共聚焦拍出来发现荧光信号并不在膜上,而是好像在整个液泡内,PCR验证和测序都表明我确实是基因序列正确了,不知道是哪出了问题

GFP融合蛋白定位


GFP融合蛋白定位-1


@starseacow 发自小木虫Android客户端
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爆炒小木虫

新虫 (小有名气)

看起来信号不是很强啊,更像是杂信号

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2楼2022-02-13 11:49:31
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咸鱼披萨

新虫 (小有名气)

请问您有没有做洋葱上表皮亚细胞定位的protocol?最近也要做这个实验没有什么头绪,另外请问洋葱的选择有什么讲究吗?红洋葱还是黄洋葱?然后选取的洋葱部位是怎样的?是里面几层比较好还是外面几层比较好?像您图中的这种是做了质壁分离吗?条件是什么呢?
因为没有接触过,所以问题比较多谢谢
3楼2022-03-29 21:44:44
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wandouGGGM

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 咸鱼披萨 at 2022-03-29 21:44:44
请问您有没有做洋葱上表皮亚细胞定位的protocol?最近也要做这个实验没有什么头绪,另外请问洋葱的选择有什么讲究吗?红洋葱还是黄洋葱?然后选取的洋葱部位是怎样的?是里面几层比较好还是外面几层比较好?像 ...

质壁分离用25-30%蔗糖溶液处理,洋葱没试过黄的但文献里都用的紫皮,紫皮洋葱外面几层细胞会有色素所以注意点

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4楼2022-10-15 23:20:03
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