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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 天然产物分离纯化中离子交换原理！
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东波、、、

新虫 (小有名气)

[求助] 天然产物分离纯化中离子交换原理！ 已有1人参与

分离纯化现在主要是纯化多糖和蛋白质，离子交换用的填料种类也比较多，比如DEAE Sepharose FF和DEAE纤维素-52应该是最常用两种填料，洗脱过程原理应该差不多。

问题一：为什么DEAE FF需要缓冲液提供一定的ph环境，DEAE 纤维素-52则不需要，用的纯水。

问题二：有人解答是缓冲液提供的ph环境，能让样品带负电，那原理是怎样的呢？

问题三（最疑惑）：洗脱完毕，用NaCl或NaOH再生时，Cl-和OH-离子已经和交换基团结合满了，再上样品（多糖或蛋白质）时怎么又能和样品结合呢？可能是样品结合能力强吧？如果是结合能力强，那怎么又能用NaCl或NaOH洗脱下来呢？
很疑惑啊！！

@biostar2009 @wizardfan 发自小木虫Android客户端
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1楼 2022-02-12 01:55:13
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zjutwwt

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 东波、、、 at 2022-02-17 17:22:25
谢谢您的回复!
buffer 碱性使产品带负电,酸性下带正电,等电点比目标样品高是阴离子交换,比目标样品低是阳离子交换,这是我个人理解,不知道是不是这样?
我做的是多糖的纯化,是阴离子交换,用deae ff填料,高盐洗脱Cl ...

buffer pH低于产品等电点，产品带正电，可以上阳离子交换；反之带负电，上阴离子交换；填料上的CL-没有去掉，留在上面和骨架上的N结合
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5楼2022-02-25 15:13:52
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东波、、、

新虫 (小有名气)
问题三换个说法问，在逐渐增大高浓度盐溶液把样品洗脱干净后，那么填料上已经结合满了高强度盐离子，所以下次上样，样品又怎么会吸附到填料上呢？

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2楼2022-02-12 01:59:30
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zjutwwt

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

buffer ph对应等电点，使产品带正电或者负电；
离子交换过程除了交换基团强弱外，还和交换液的浓度有关系；
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东波、、、
3楼2022-02-15 15:44:31
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东波、、、

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by zjutwwt at 2022-02-15 15:44:31
buffer ph对应等电点，使产品带正电或者负电；
离子交换过程除了交换基团强弱外，还和交换液的浓度有关系；

谢谢您的回复!
buffer 碱性使产品带负电,酸性下带正电,等电点比目标样品高是阴离子交换,比目标样品低是阳离子交换,这是我个人理解,不知道是不是这样?
我做的是多糖的纯化,是阴离子交换,用deae ff填料,高盐洗脱Cl-替换出多糖后,再用缓冲液(不含盐)进行平衡,直接进行第二个周期的多糖纯化.
但有一点不理解的是作为替换的CI-将多糖洗脱下来后,留在基团上的CI-是怎么样去掉的呢?因为只有只有去掉填料才能恢复到最初的状态,才能进行下一次纯化?
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4楼2022-02-17 17:22:25
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