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东波、、、

新虫 (小有名气)

[求助] 天然产物分离纯化中离子交换原理!已有1人参与

分离纯化现在主要是纯化多糖和蛋白质,离子交换用的填料种类也比较多,比如DEAE Sepharose FF和DEAE纤维素-52应该是最常用两种填料,洗脱过程原理应该差不多。

问题一:为什么DEAE FF需要缓冲液提供一定的ph环境,DEAE 纤维素-52则不需要,用的纯水。

问题二:有人解答是缓冲液提供的ph环境,能让样品带负电,那原理是怎样的呢?

问题三(最疑惑):洗脱完毕,用NaCl或NaOH再生时,Cl-和OH-离子已经和交换基团结合满了,再上样品(多糖或蛋白质)时怎么又能和样品结合呢?可能是样品结合能力强吧?如果是结合能力强,那怎么又能用NaCl或NaOH洗脱下来呢?
很疑惑啊!!

@biostar2009 @wizardfan 发自小木虫Android客户端
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东波、、、

新虫 (小有名气)

问题三换个说法问,在逐渐增大高浓度盐溶液把样品洗脱干净后,那么填料上已经结合满了高强度盐离子,所以下次上样,样品又怎么会吸附到填料上呢?

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2楼2022-02-12 01:59:30
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zjutwwt

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

buffer ph对应等电点,使产品带正电或者负电;
离子交换过程除了交换基团强弱外,还和交换液的浓度有关系;

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3楼2022-02-15 15:44:31
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东波、、、

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by zjutwwt at 2022-02-15 15:44:31
buffer ph对应等电点,使产品带正电或者负电;
离子交换过程除了交换基团强弱外,还和交换液的浓度有关系;

谢谢您的回复!
buffer 碱性使产品带负电,酸性下带正电,等电点比目标样品高是阴离子交换,比目标样品低是阳离子交换,这是我个人理解,不知道是不是这样?
我做的是多糖的纯化,是阴离子交换,用deae ff填料,高盐洗脱Cl-替换出多糖后,再用缓冲液(不含盐)进行平衡,直接进行第二个周期的多糖纯化.
但有一点不理解的是作为替换的CI-将多糖洗脱下来后,留在基团上的CI-是怎么样去掉的呢?因为只有只有去掉填料才能恢复到最初的状态,才能进行下一次纯化?
4楼2022-02-17 17:22:25
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zjutwwt

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 东波、、、 at 2022-02-17 17:22:25
谢谢您的回复!
buffer 碱性使产品带负电,酸性下带正电,等电点比目标样品高是阴离子交换,比目标样品低是阳离子交换,这是我个人理解,不知道是不是这样?
我做的是多糖的纯化,是阴离子交换,用deae ff填料,高盐洗脱Cl ...

buffer pH低于产品等电点,产品带正电,可以上阳离子交换;反之带负电,上阴离子交换;填料上的CL-没有去掉,留在上面和骨架上的N结合
5楼2022-02-25 15:13:52
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东波、、、

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zjutwwt at 2022-02-25 15:13:52
buffer pH低于产品等电点,产品带正电,可以上阳离子交换;反之带负电,上阴离子交换;填料上的CL-没有去掉,留在上面和骨架上的N结合...

再次感谢您^O^
cl-留在上面,平衡液平衡后上样,不影响下一次的纯化吗?因为刚买来的填料第一次使用的话,上面是没有结合CI -的?

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6楼2022-03-03 00:48:07
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凯琪梅夫

新虫 (初入文坛)

请问楼主问题三弄明白了吗?方便帮忙解释一下吗

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7楼2023-02-27 09:26:00
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