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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » WB时，上方时常出现非特异性条带
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是科研小迷糊呀

金虫 (小有名气)
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WB时，上方时常出现非特异性条带
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问题描述：WB相关问题！！！
最近一直在做WB，但是出现一个不正常的情况，前面验证抗体的时候，抗体是比较好的，但是后面正式开始实验的时候，在目的条带的上方总是出现一个非特异性条带，并且颜色很深，后面重复几次之后，发现同一批蛋白样品有时出现这样的情况，有时会恢复正常，且同一批做的其他的抗体也会同时出现这种现象（正常的时候都正常，不出现上线的带，不正常的时候都不正常，所有抗体上面都出现一条带。
请大家帮帮忙，困扰了很久的问题，谢谢！

WB时，上方时常出现非特异性条带


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1楼 2022-01-25 17:30:11
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刘楠楠05

新虫 (著名写手)
★
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你正常情况下，也是三条带，只是最上面那个带弱，说明抗体是能敷出这个带，是多克隆抗体吧？你说的非正常条带是最上面那个杂带很亮，是蛋白裂解问题，还是蛋白降解问题？下次注意细胞裂解和降解问题，同时可以试试把这个杂带跑分开，剪掉。

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6楼2022-01-25 19:38:21
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是科研小迷糊呀

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 刘楠楠05 at 2022-01-25 19:38:21
你正常情况下，也是三条带，只是最上面那个带弱，说明抗体是能敷出这个带，是多克隆抗体吧？你说的非正常条带是最上面那个杂带很亮，是蛋白裂解问题，还是蛋白降解问题？下次注意细胞裂解和降解问题，同时可以试试把 ...

这两个图是同一批样品做的，同一批样品，条件都一样的情况下，就会有这两种情况。并且同一批样品，做不同的蛋白也会有这样的情况，发生这种情况的时候3个抗体一起发生，正常的话就一起正常。

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7楼2022-01-26 10:18:23
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shuaibia6

金虫 (小有名气)
★
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我对wb不是很了解，但是从PAGE胶图来看造成这种现象的原因应该是这2次电泳的迁移速率不一样，导致胶图呈现不一样的效果。
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8楼2022-01-26 11:11:04
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刘楠楠05

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 上善若水白杨 at 2022-01-26 10:18:23
这两个图是同一批样品做的，同一批样品，条件都一样的情况下，就会有这两种情况。并且同一批样品，做不同的蛋白也会有这样的情况，发生这种情况的时候3个抗体一起发生，正常的话就一起正常。
...

没见过这种情况，样本降解的可能性大，建议问技术，或者换抗体

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9楼2022-01-26 11:14:44
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是科研小迷糊呀

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by shuaibia6 at 2022-01-26 11:11:04
我对wb不是很了解，但是从PAGE胶图来看造成这种现象的原因应该是这2次电泳的迁移速率不一样，导致胶图呈现不一样的效果。

谢谢你，我也一直在考虑胶的问题，因为WB需要有浓缩胶和分离胶，小电压跑过浓缩胶，再大一些电压跑分离胶。会不会是浓缩胶做的太长，导致大电压下跑浓缩胶，而有一部分进入了分离胶，这样造成了蛋白分离了，一部分在上一部分在下。

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10楼2022-01-26 20:09:46
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tzynew2楼
2022-01-25 17:32   回复  
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花小花?3楼
2022-01-25 18:11   回复  
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yongde4楼
2022-01-25 18:12   回复  
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Silence_925楼
2022-01-25 18:17   回复  
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