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是科研小迷糊呀

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WB时,上方时常出现非特异性条带
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问题描述:WB相关问题!!!
最近一直在做WB,但是出现一个不正常的情况,前面验证抗体的时候,抗体是比较好的,但是后面正式开始实验的时候,在目的条带的上方总是出现一个非特异性条带,并且颜色很深,后面重复几次之后,发现同一批蛋白样品有时出现这样的情况,有时会恢复正常,且同一批做的其他的抗体也会同时出现这种现象(正常的时候都正常,不出现上线的带,不正常的时候都不正常,所有抗体上面都出现一条带。
请大家帮帮忙,困扰了很久的问题,谢谢!

WB时,上方时常出现非特异性条带


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刘楠楠05

新虫 (著名写手)



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你正常情况下,也是三条带,只是最上面那个带弱,说明抗体是能敷出这个带,是多克隆抗体吧?你说的非正常条带是最上面那个杂带很亮,是蛋白裂解问题,还是蛋白降解问题?下次注意细胞裂解和降解问题,同时可以试试把这个杂带跑分开,剪掉。

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6楼2022-01-25 19:38:21
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是科研小迷糊呀

金虫 (小有名气)


引用回帖:
6楼: Originally posted by 刘楠楠05 at 2022-01-25 19:38:21
你正常情况下,也是三条带,只是最上面那个带弱,说明抗体是能敷出这个带,是多克隆抗体吧?你说的非正常条带是最上面那个杂带很亮,是蛋白裂解问题,还是蛋白降解问题?下次注意细胞裂解和降解问题,同时可以试试把 ...

这两个图是同一批样品做的,同一批样品,条件都一样的情况下,就会有这两种情况。并且同一批样品,做不同的蛋白也会有这样的情况,发生这种情况的时候3个抗体一起发生,正常的话就一起正常。

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7楼2022-01-26 10:18:23
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shuaibia6

金虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我对wb不是很了解,但是从PAGE胶图来看造成这种现象的原因应该是这2次电泳的迁移速率不一样,导致胶图呈现不一样的效果。
8楼2022-01-26 11:11:04
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刘楠楠05

新虫 (著名写手)



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引用回帖:
7楼: Originally posted by 上善若水白杨 at 2022-01-26 10:18:23
这两个图是同一批样品做的,同一批样品,条件都一样的情况下,就会有这两种情况。并且同一批样品,做不同的蛋白也会有这样的情况,发生这种情况的时候3个抗体一起发生,正常的话就一起正常。
...

没见过这种情况,样本降解的可能性大,建议问技术,或者换抗体

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9楼2022-01-26 11:14:44
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是科研小迷糊呀

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引用回帖:
8楼: Originally posted by shuaibia6 at 2022-01-26 11:11:04
我对wb不是很了解,但是从PAGE胶图来看造成这种现象的原因应该是这2次电泳的迁移速率不一样,导致胶图呈现不一样的效果。

谢谢你,我也一直在考虑胶的问题,因为WB需要有浓缩胶和分离胶,小电压跑过浓缩胶,再大一些电压跑分离胶。会不会是浓缩胶做的太长,导致大电压下跑浓缩胶,而有一部分进入了分离胶,这样造成了蛋白分离了,一部分在上一部分在下。

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10楼2022-01-26 20:09:46
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tzynew2楼
2022-01-25 17:32   回复  
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2022-01-25 18:11   回复  
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yongde4楼
2022-01-25 18:12   回复  
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2022-01-25 18:17   回复  
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