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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】求助：反相柱的具体操作和注意的细节
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wangnanyc

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】求助：反相柱的具体操作和注意的细节

问一下反相柱装柱，上样，洗脱剂比例，接样等等的具体操作及注意的细节有什么啊，有经验的高手给说说吧 谢谢哦
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革命尚未成功
1楼 2009-08-27 23:33:42
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左李菲子

金虫 (小有名气)
★
wingcat(金币+1):谢谢
主要看你的样品，洗脱剂比例要自己摸索，注意用完后要用100％的乙腈洗
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2楼2009-08-28 08:23:17
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chinabull

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
wingcat(金币+1):谢谢
看看液相色谱方面的书，里面都有详细的说明的。
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3楼2009-08-28 08:42:32
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wjyyh1983

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
wingcat(金币+1):谢谢
如果做得是液相色谱的话，你还会装柱？太厉害了，上样前样品溶解最好是用流动相溶解，洗脱比例那要看你自己样品的极性，有时可以适当加酸加碱调节PH，接样参考分析谱图
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4楼2009-08-28 10:00:48
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luomuwuhen

金虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
wingcat(金币+1):谢谢
1.按柱子时候看好柱子上的方向就好了，不过要拧紧，要不然会漏液
2.流动相比例一般的样品都会有标准可查，或者在网上搜搜就会有，当然有很多查不到的，那就需要你自己摸索了。基本上先是用甲醇和水调节比例来改善分离度，如果峰形不好就需要调节PH或加入缓冲盐了。不过如果冲含有缓冲盐的流动相前要先用滤过超过的水将柱子内的甲醇或乙腈冲出来，不然缓冲盐就有可能在甲醇或乙腈中析出，对柱子有损害。
3.进样量不要太大也不要太小，太小很多含量低的成分显不出来。
4.紫外检测器波长选择问题：如果要分离含有很多成分的混合样，就要知道每种成分的紫外最大吸收波长，然后综合考虑选择合适的波长。
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药物合成
5楼2009-08-28 11:04:59
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wangnanyc

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by wjyyh1983 at 2009-8-28 10:00:
如果做得是液相色谱的话，你还会装柱？太厉害了，上样前样品溶解最好是用流动相溶解，洗脱比例那要看你自己样品的极性，有时可以适当加酸加碱调节PH，接样参考分析谱图

哦， 我说的不是HPLC，是反相硅胶装的柱子，不只是HPLC是反相的吧，我们买的反相填料用普通的色谱柱装柱过柱子。我没过过这样的柱子，昨晚装了一个，现在还没上样，流速 好慢
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革命尚未成功
6楼2009-08-28 12:39:26
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wangnanyc

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by luomuwuhen at 2009-8-28 11:04:
1.按柱子时候看好柱子上的方向就好了，不过要拧紧，要不然会漏液
2.流动相比例一般的样品都会有标准可查，或者在网上搜搜就会有，当然有很多查不到的，那就需要你自己摸索了。基本上先是用甲醇和水调节比例来改善 ...

哦，可能是表达的不太对，我说的反相柱，普通的柱子，不是HPLC，还没做过HPLC，想试试普通的反相柱想除除色素。敢问高手有没有这反面的经验，我装了个反相柱还没上样，流速很慢，我不太清楚梯度怎么变换，也没点板，据说除色素不用点板，不知道怎么个换梯度法，用多少体积
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革命尚未成功
7楼2009-08-28 12:43:13
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zhangsibao

木虫 (正式写手)

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★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
wingcat(金币+1):谢谢
不知道楼主说的装柱是将成品色谱柱安装到液相系统中还是自己填装新的色谱柱，两者有很大区别。如果是前者，；楼主可以参照4楼的建议。如果是自己装填色谱柱的话，楼主就要看楼主的溶剂以及填料了。做完之后要做色谱柱评价的。
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8楼2009-08-28 15:46:24
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天下四方人

新虫 (初入文坛)
说得模棱两可，看不明白
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9楼2009-08-31 20:22:45
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