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狮子美

铁虫 (正式写手)

[求助] PCR阴性跑出条带 已有4人参与

做PCR时,做的阴性对照(未加模板)总是能跑出条带,换了酶,引物,水,枪头,PCR管,还是会出现。请问还应该考虑哪些因素,该如何解决?
PCR扩增的是细菌的16S
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Mb67zgi

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1. 是否是器械污染,比如上一次PCR反应时产物扩散到仪器内或移液枪污染(比如吸取菌液时倒灌到枪的管腔内)?如果是,换PCR仪器;建立UDG-dUTP防污染PCR;使用核酸清除剂彻底清扫实验器械与环境
2. 人为因素。可能不会有,但不排除有人给你使坏
10楼2022-01-09 01:04:53
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xiao7270

至尊木虫 (著名写手)

看产物大小,可能扩增的是引物对二聚体

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2楼2022-01-08 13:49:23
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狮子美

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xiao7270 at 2022-01-08 13:49:23
看产物大小,可能扩增的是引物对二聚体

产物和目标产物一样大

发自小木虫Android客户端
3楼2022-01-08 14:25:31
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狮子美

铁虫 (正式写手)

1和2阴性对照,3和4目标产物
PCR阴性跑出条带



发自小木虫Android客户端
4楼2022-01-08 14:26:24
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