24小时热门版块排行榜    

查看: 2866  |  回复: 19

狮子美

铁虫 (正式写手)

[求助] PCR阴性跑出条带 已有4人参与

做PCR时,做的阴性对照(未加模板)总是能跑出条带,换了酶,引物,水,枪头,PCR管,还是会出现。请问还应该考虑哪些因素,该如何解决?
PCR扩增的是细菌的16S
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Mb67zgi

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1. 是否是器械污染,比如上一次PCR反应时产物扩散到仪器内或移液枪污染(比如吸取菌液时倒灌到枪的管腔内)?如果是,换PCR仪器;建立UDG-dUTP防污染PCR;使用核酸清除剂彻底清扫实验器械与环境
2. 人为因素。可能不会有,但不排除有人给你使坏
10楼2022-01-09 01:04:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
狮子美: 金币+50, ★★★很有帮助 2022-01-13 23:19:45
阴性对照有条带,气溶胶污染的几率很高,估计你们经常扩增这个区域!
更换扩增区域,重新设计合成引物可以最大程度避免你的污染情况,
16楼2022-01-11 15:05:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

xiao7270

至尊木虫 (著名写手)

看产物大小,可能扩增的是引物对二聚体

发自小木虫Android客户端
2楼2022-01-08 13:49:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

狮子美

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xiao7270 at 2022-01-08 13:49:23
看产物大小,可能扩增的是引物对二聚体

产物和目标产物一样大

发自小木虫Android客户端
3楼2022-01-08 14:25:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

狮子美

铁虫 (正式写手)

1和2阴性对照,3和4目标产物
PCR阴性跑出条带



发自小木虫Android客户端
4楼2022-01-08 14:26:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

再找更阴性的对照试试,比如不放酶,NTP,引物。感觉还是有污染。

发自小木虫Android客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

5楼2022-01-08 19:41:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

试剂污染

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

6楼2022-01-08 19:58:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

狮子美

铁虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2022-01-08 19:41:24
再找更阴性的对照试试,比如不放酶,NTP,引物。感觉还是有污染。

我试试

发自小木虫Android客户端
7楼2022-01-08 23:18:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

狮子美

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2022-01-08 19:41:24
再找更阴性的对照试试,比如不放酶,NTP,引物。感觉还是有污染。

谢谢

发自小木虫Android客户端
8楼2022-01-08 23:19:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

狮子美

铁虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2022-01-08 19:58:00
试剂污染

全都换了新的,还是不太行

发自小木虫Android客户端
9楼2022-01-08 23:19:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 狮子美 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 7/350 2026-08-04 04:50 by k7OM8YghWbkC
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 7/350 2026-08-04 04:46 by k7OM8YghWbkC
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 8/400 2026-08-04 04:46 by k7OM8YghWbkC
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 5/250 2026-08-04 04:44 by k7OM8YghWbkC
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 8/400 2026-08-04 04:41 by k7OM8YghWbkC
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备? 50+3 kf2781974 2026-07-31 9/450 2026-08-04 03:56 by kf2781974
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 7/350 2026-08-04 03:35 by k7OM8YghWbkC
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 8/400 2026-08-04 03:21 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 12/600 2026-08-04 03:17 by k7OM8YghWbkC
[基金申请] 什么时候能放榜呀? +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
[高分子] UV压敏胶开发 +3 ichall 2026-07-30 5/250 2026-08-03 14:40 by Sunrisepay
[基金申请] 面上提前没消息,有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 16/800 2026-08-03 12:23 by fuweiguochen
[基金申请] 面上再次挂了,太难了,躺也躺不了,倦也卷不过,小学校之殇! +19 低垂的野花 2026-07-31 25/1250 2026-08-03 09:25 by gy116024
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +16 布布和一二 2026-07-30 22/1100 2026-08-03 09:20 by gy116024
[教师之家] 基础研究怎么拉横向,学校到款任务越来越多,难以完成 拉横向,都有哪些途径啊 +8 锦衣卫寒战 2026-07-28 12/600 2026-08-03 08:22 by syl200707
[基金申请] 微信指数没变化,科研之友没阅读 +15 wangze12014 2026-07-28 19/950 2026-08-02 20:05 by 蔡棒棒菂
[考博] 2027年申博 50+3 射雕英雄胜 2026-07-30 3/150 2026-08-02 09:36 by lfy8008
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液,是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 系统今天又提示维护了,估计离放榜不远了 +11 winnerche 2026-07-29 15/750 2026-07-30 23:08 by jnhyjjm
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
信息提示
请填处理意见