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狮子美

铁虫 (正式写手)

[求助] PCR阴性跑出条带 已有4人参与

做PCR时,做的阴性对照(未加模板)总是能跑出条带,换了酶,引物,水,枪头,PCR管,还是会出现。请问还应该考虑哪些因素,该如何解决?
PCR扩增的是细菌的16S
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Mb67zgi

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1. 是否是器械污染,比如上一次PCR反应时产物扩散到仪器内或移液枪污染(比如吸取菌液时倒灌到枪的管腔内)?如果是,换PCR仪器;建立UDG-dUTP防污染PCR;使用核酸清除剂彻底清扫实验器械与环境
2. 人为因素。可能不会有,但不排除有人给你使坏
10楼2022-01-09 01:04:53
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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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狮子美: 金币+50, ★★★很有帮助 2022-01-13 23:19:45
阴性对照有条带,气溶胶污染的几率很高,估计你们经常扩增这个区域!
更换扩增区域,重新设计合成引物可以最大程度避免你的污染情况,
16楼2022-01-11 15:05:45
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普通回帖

xiao7270

至尊木虫 (著名写手)

看产物大小,可能扩增的是引物对二聚体

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2楼2022-01-08 13:49:23
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狮子美

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xiao7270 at 2022-01-08 13:49:23
看产物大小,可能扩增的是引物对二聚体

产物和目标产物一样大

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3楼2022-01-08 14:25:31
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狮子美

铁虫 (正式写手)

1和2阴性对照,3和4目标产物
PCR阴性跑出条带



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4楼2022-01-08 14:26:24
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

再找更阴性的对照试试,比如不放酶,NTP,引物。感觉还是有污染。

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

5楼2022-01-08 19:41:24
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

试剂污染

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

6楼2022-01-08 19:58:00
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狮子美

铁虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2022-01-08 19:41:24
再找更阴性的对照试试,比如不放酶,NTP,引物。感觉还是有污染。

我试试

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7楼2022-01-08 23:18:53
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狮子美

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2022-01-08 19:41:24
再找更阴性的对照试试,比如不放酶,NTP,引物。感觉还是有污染。

谢谢

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8楼2022-01-08 23:19:19
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狮子美

铁虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2022-01-08 19:58:00
试剂污染

全都换了新的,还是不太行

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9楼2022-01-08 23:19:54
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