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狮子美

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[求助] PCR阴性跑出条带已有4人参与

做PCR时，做的阴性对照（未加模板）总是能跑出条带，换了酶，引物，水，枪头，PCR管，还是会出现。请问还应该考虑哪些因素，该如何解决？
PCR扩增的是细菌的16S

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1楼 2022-01-08 10:28:10

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Mb67zgi

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

1. 是否是器械污染，比如上一次PCR反应时产物扩散到仪器内或移液枪污染（比如吸取菌液时倒灌到枪的管腔内）？如果是，换PCR仪器；建立UDG-dUTP防污染PCR；使用核酸清除剂彻底清扫实验器械与环境
2. 人为因素。可能不会有，但不排除有人给你使坏

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10楼2022-01-09 01:04:53

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elmanbio

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【答案】应助回帖

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狮子美: 金币+50, ★★★很有帮助 2022-01-13 23:19:45

阴性对照有条带，气溶胶污染的几率很高，估计你们经常扩增这个区域！
更换扩增区域，重新设计合成引物可以最大程度避免你的污染情况，

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16楼2022-01-11 15:05:45

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xiao7270

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看产物大小，可能扩增的是引物对二聚体

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2楼2022-01-08 13:49:23

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狮子美

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2楼: Originally posted by xiao7270 at 2022-01-08 13:49:23
看产物大小，可能扩增的是引物对二聚体

产物和目标产物一样大

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3楼2022-01-08 14:25:31

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狮子美

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专业: 基因组学

1和2阴性对照，3和4目标产物

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4楼2022-01-08 14:26:24

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hanxiaominhu

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再找更阴性的对照试试，比如不放酶，NTP,引物。感觉还是有污染。

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狮子美

5楼2022-01-08 19:41:24

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试剂污染

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6楼2022-01-08 19:58:00

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5楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2022-01-08 19:41:24
再找更阴性的对照试试，比如不放酶，NTP,引物。感觉还是有污染。

我试试

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7楼2022-01-08 23:18:53

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5楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2022-01-08 19:41:24
再找更阴性的对照试试，比如不放酶，NTP,引物。感觉还是有污染。

谢谢

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8楼2022-01-08 23:19:19

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6楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2022-01-08 19:58:00
试剂污染

全都换了新的，还是不太行

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9楼2022-01-08 23:19:54

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