| 查看: 698 | 回复: 0 | |||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者半调子梅花将赠送您 5 个金币 | |||
半调子梅花铁虫 (初入文坛)
|
[求助]
关于噬菌体展示抗体筛选过程中抗体序列缺失的问题。
|
||
|
请教各位大神： 本人从事纳米抗体研发工作，主要运用噬菌体展示技术结合固相筛选法筛选纳米抗体，我们构建了一个天然库，在筛靶点的过程中单克隆phage-ELISA显示阳性，然后对该克隆进行菌落PCR，发现条带明显比预期短了很多，理论应该是600bp的条带，却只有500bp或者250bp，对这个500bp和250bp片段进行测序发现不是空载，能够找到正反引物，经过比对，这些片段是不完整的抗体序列，其中500bp的条带有大片段缺失CDR3序列和部分FR序列，而250bp则缺失更多，实际抗体序列只剩下一百多bp，几乎缺失所有CDR序列和部分FR序列。在建库的时候我们检测过库的阳性率，基本上都是对的序列，几十个样本PCR都没有这种序列，而经过诱导噬菌体（辅助噬菌体为M13K07）后就有了，而且在筛选中大量富集，特异性还很高（不跟milk结合）。这个问题很困扰我。哪位大神知道原因和原理，有什么办法解决。  |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 噬菌体展示 |
» 猜你喜欢
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
-
透明质酸酶的作用机制：如何实现药物递送
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有87人回复
-
爱思维尔旗下LWT投稿
已经有9人回复
-
替拉扎明为缺氧选择性细胞毒药物研究提供新思路
已经有0人回复
-
拉坦前列腺素(Latanoprost)：前列腺素F2α衍生物如何成为青光眼一线用药
已经有0人回复
-
卟啉家族中的明星分子：MESO-四(3,5-二溴-4-羟基苯基)卟啉的性质与制备
已经有1人回复
-
宠物寄生虫防治：氟雷拉纳阻断GABA受体，持效12周驱杀跳蚤蜱虫
已经有0人回复
-
为呼吸打开通道：依伐卡托的科学之旅
已经有1人回复
-
Dordaviprone（ONC201）：小分子药物在中线胶质瘤中的应用
已经有0人回复
-
依喜替康：新型喜树碱衍生物的研究进展
已经有1人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
30