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半调子梅花铁虫 (初入文坛)
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[求助]
关于噬菌体展示抗体筛选过程中抗体序列缺失的问题。
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请教各位大神： 本人从事纳米抗体研发工作，主要运用噬菌体展示技术结合固相筛选法筛选纳米抗体，我们构建了一个天然库，在筛靶点的过程中单克隆phage-ELISA显示阳性，然后对该克隆进行菌落PCR，发现条带明显比预期短了很多，理论应该是600bp的条带，却只有500bp或者250bp，对这个500bp和250bp片段进行测序发现不是空载，能够找到正反引物，经过比对，这些片段是不完整的抗体序列，其中500bp的条带有大片段缺失CDR3序列和部分FR序列，而250bp则缺失更多，实际抗体序列只剩下一百多bp，几乎缺失所有CDR序列和部分FR序列。在建库的时候我们检测过库的阳性率，基本上都是对的序列，几十个样本PCR都没有这种序列，而经过诱导噬菌体（辅助噬菌体为M13K07）后就有了，而且在筛选中大量富集，特异性还很高（不跟milk结合）。这个问题很困扰我。哪位大神知道原因和原理，有什么办法解决。  |
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 噬菌体展示 |
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