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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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半调子梅花

铁虫 (初入文坛)

[求助] 关于噬菌体展示抗体筛选过程中抗体序列缺失的问题。

请教各位大神:
      
       本人从事纳米抗体研发工作,主要运用噬菌体展示技术结合固相筛选法筛选纳米抗体,我们构建了一个天然库,在筛靶点的过程中单克隆phage-ELISA显示阳性,然后对该克隆进行菌落PCR,发现条带明显比预期短了很多,理论应该是600bp的条带,却只有500bp或者250bp,对这个500bp和250bp片段进行测序发现不是空载,能够找到正反引物,经过比对,这些片段是不完整的抗体序列,其中500bp的条带有大片段缺失CDR3序列和部分FR序列,而250bp则缺失更多,实际抗体序列只剩下一百多bp,几乎缺失所有CDR序列和部分FR序列。在建库的时候我们检测过库的阳性率,基本上都是对的序列,几十个样本PCR都没有这种序列,而经过诱导噬菌体(辅助噬菌体为M13K07)后就有了,而且在筛选中大量富集,特异性还很高(不跟milk结合)。这个问题很困扰我。哪位大神知道原因和原理,有什么办法解决。
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