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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 基因克隆的引物设计问题
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蚝油生菜

新虫 (小有名气)

[求助] 基因克隆的引物设计问题

新人求助，我要在提出来的全DNA组中克隆出一段目的基因，然后连接到质粒上，我在primer 5上设计的一对引物两边直接加上了酶切位点，然后就p不出来条带了，请问应该如何解决
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1楼 2021-12-25 10:20:50
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蜗牛奶糖

新虫 (初入文坛)
可以试试先不加酶切位点扩增连到T载体上，再以质粒为模板用带酶切位点的引物扩增然后连目的载体；但是要注意T载体和目的载体的抗性尽量选择不同抗性，这样可以避免切胶回收这一步

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2楼2022-01-07 11:57:28
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