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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白提取的问题
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空盖子

铜虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白提取的问题

大家好，我提取蛋白的方法是  收集菌体，然后加蛋白提取液煮沸10分钟，然后离心，收集上清，请问，上清液是菌体所有的蛋白吗，沉淀里有蛋白吗，如果菌体有包涵体的话，会在沉淀里吗，那如果在我该怎么处理呢？？
  在书上看，将上清和沉淀都跑电泳，但是沉淀我该怎么溶解呢
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1楼2009-08-26 12:47:59
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franciszjm

金虫 (初入文坛)
你怎么还要煮沸的 ？ 什么酶啊？
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2楼2009-08-26 13:11:55
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baisuilan

金虫 (正式写手)
要加上样缓冲液再煮啊。蛋白质会和SDS结合的。如果有包涵体的话，可以用8M尿素溶解之后再煮。不过直接加上样缓冲液，煮完离心取上清跑电泳也可以的。
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3楼2009-08-26 13:13:02
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baisuilan

金虫 (正式写手)
还有，用溶菌酶或者超声裂解的话，直接离心，上清里是可溶部分，沉淀里有包涵体啊细胞碎片阿什么的，不可以没加上样缓冲液就煮的，会把蛋白煮降解的
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4楼2009-08-26 13:15:25
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leirihua

铜虫 (小有名气)
你说的是细菌吗，假如是就不行，煮沸根本不能破坏其细胞壁。可以先用酶处理--再过滤——
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5楼2009-08-26 14:23:18
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空盖子

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by baisuilan at 2009-8-26 13:13:
要加上样缓冲液再煮啊。蛋白质会和SDS结合的。如果有包涵体的话，可以用8M尿素溶解之后再煮。不过直接加上样缓冲液，煮完离心取上清跑电泳也可以的。

我的蛋白提取液里就有上样缓冲液，这样煮的话，包涵体也会溶解吗？？还是在沉淀里呢
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6楼2009-08-27 13:46:11
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空盖子

铜虫 (初入文坛)
还有请问  8M的尿素怎么配置啊
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7楼2009-08-27 13:53:14
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
引用回帖:
Originally posted by 空盖子 at 2009-8-27 13:53:
还有请问  8M的尿素怎么配置啊

尿素的分子量有，然后乘8 ，称量这么多克，去离子水定容到1L。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
8楼2009-08-27 14:28:46
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