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空盖子

铜虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白提取的问题

大家好,我提取蛋白的方法是  收集菌体,然后加蛋白提取液煮沸10分钟,然后离心,收集上清,请问,上清液是菌体所有的蛋白吗,沉淀里有蛋白吗,如果菌体有包涵体的话,会在沉淀里吗,那如果在我该怎么处理呢??
  在书上看,将上清和沉淀都跑电泳,但是沉淀我该怎么溶解呢
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

引用回帖:
Originally posted by 空盖子 at 2009-8-27 13:53:
还有请问  8M的尿素怎么配置啊

尿素的分子量有,然后乘8 ,称量这么多克,去离子水定容到1L。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
8楼2009-08-27 14:28:46
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查看全部 8 个回答

franciszjm

金虫 (初入文坛)

你怎么还要煮沸的 ? 什么酶啊?
2楼2009-08-26 13:11:55
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baisuilan

金虫 (正式写手)

要加上样缓冲液再煮啊。蛋白质会和SDS结合的。如果有包涵体的话,可以用8M尿素溶解之后再煮。不过直接加上样缓冲液,煮完离心取上清跑电泳也可以的。
3楼2009-08-26 13:13:02
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baisuilan

金虫 (正式写手)

还有,用溶菌酶或者超声裂解的话,直接离心,上清里是可溶部分,沉淀里有包涵体啊细胞碎片阿什么的,不可以没加上样缓冲液就煮的,会把蛋白煮降解的
4楼2009-08-26 13:15:25
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