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空盖子

铜虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白提取的问题

大家好,我提取蛋白的方法是  收集菌体,然后加蛋白提取液煮沸10分钟,然后离心,收集上清,请问,上清液是菌体所有的蛋白吗,沉淀里有蛋白吗,如果菌体有包涵体的话,会在沉淀里吗,那如果在我该怎么处理呢??
  在书上看,将上清和沉淀都跑电泳,但是沉淀我该怎么溶解呢
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leirihua

铜虫 (小有名气)

你说的是细菌吗,假如是就不行,煮沸根本不能破坏其细胞壁。可以先用酶处理--再过滤——
5楼2009-08-26 14:23:18
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franciszjm

金虫 (初入文坛)

你怎么还要煮沸的 ? 什么酶啊?
2楼2009-08-26 13:11:55
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baisuilan

金虫 (正式写手)

要加上样缓冲液再煮啊。蛋白质会和SDS结合的。如果有包涵体的话,可以用8M尿素溶解之后再煮。不过直接加上样缓冲液,煮完离心取上清跑电泳也可以的。
3楼2009-08-26 13:13:02
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baisuilan

金虫 (正式写手)

还有,用溶菌酶或者超声裂解的话,直接离心,上清里是可溶部分,沉淀里有包涵体啊细胞碎片阿什么的,不可以没加上样缓冲液就煮的,会把蛋白煮降解的
4楼2009-08-26 13:15:25
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