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[交流]
透明质酸抑制率实验样品组和空白对照都显色？
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实验方法：采用 Elson-Morgan 改良法测定一系列浓度（1-4mg/mL）的样品与透明质酸酶的作用，1、2 号试管( 0.5 mL 样品溶液和 0.5 mL 浓度 600 U/mL 透明质酸酶) ，3、4 号试管( 0.5 mL 蒸馏水和 0.5 mL 醋酸缓冲液) ，37 ℃保温 20 min；加入 0.1 mL ( 2.5 mol/L) 氯化钙溶液， 37 ℃保温 20 min；1、3 号试管中加入 0.5 mL 0.5 mg/mL 的透明质酸钠，2、 4 号试管中加入 0.5 mL 醋酸缓冲液，37 ℃保 温 40 min；室温放置 10 min，加入 0.5 mL 乙酰丙酮溶液( 3.5 mL 乙酰丙酮溶于 50 mL 0.1 ml/L 碳酸钠溶液中)、0.1 mL NaOH 溶液( 5 mol/L) 和 0.5 mL 蒸馏水，放入沸水浴中 15 min；冷却 5 min，放入冰水浴 10 min;室温放置 10 min，加入 1 mL P-DAB 显色剂( 0.8g DBMA 与 15mL 浓 HCl 以及无水乙醇混合均匀)；充分振荡后，加入无水乙醇3.5 mL，室温放置 30 min，显色，取150μL置96孔板放入酶标仪在 530 nm 处测定 1、2、3、4 号四支试管的吸光度 A1、A2、A3、A4。按下式计算透明质酸酶的抑制率： 透明质酸酶抑制率= ) [1− （A1- A2）/(A3- A4 )]×100% 问题是计算出来的抑制率超过100%和有些是负的，放入沸水浴后样品和空白都显示是棕红色，配的显色剂是浅绿色，不知道是什么原因，有咩有做过的大神指导指导啊？ |
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