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丫星空丫

木虫 (小有名气)

[求助] pnpp法测脂肪酶活性

1、ph=8的tris-hcl缓冲液的配制:6.05g tris 置于 1l 烧杯中,去离子水溶解,加入 0.1%阿拉伯树胶粉(1g)、0.2%脱氧胆酸钠(2g),配置成 50mmol/l ph 8.0 的tris‐hcl缓冲液。(溶液浑浊)不加脱氧胆酸钠溶液澄清。
2、胰脂肪酶溶液:tris‐hcl 缓冲液溶解 0.25g 胰脂肪酶,混匀静置,5 000r/min 离心 5min,取上清液,配成 1.2mg/ml 胰脂肪酶溶液(ppl),‐20℃保存。
3、底物溶液:4‐硝基苯棕榈酸酯(pnpp)20mg 溶5ml异丙醇,再用 tris‐hcl 缓冲液定容到100ml。(溶液变浑浊)加入曲拉通-100,浑浊显现未改变。
4、底物溶液:4‐硝基苯棕榈酸酯(pnpp)2mg 溶10ml异丙醇。超声15min,溶液变成澄清,加入酶液后,变浑浊。

想请教一下相关科研领域的大神们,有没有做过相关实验,浑浊是怎么回事,该怎么解决,pnpp法测脂肪酶活性实验中要注意哪些细节,(附件图片是参考文献操作)已经试了好长时间了,急求帮助,谢谢!

pnpp法测脂肪酶活性


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吃得苦中苦,方为人上人
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ZZZZ周

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 城南a at 2022-01-05 19:58:30
你好!我最近也在做胰脂肪酶抑制试验,加了底物之后出现沉淀,请问你解决这个问题了吗?...

你好,我最近在做这个,请问解决了吗

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7楼2022-12-01 10:25:05
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不才xuzhouyi

新虫 (初入文坛)

是的,我的也是一直混浊,感觉像底物不溶于体系,实验一直失败,换了底物4-对硝基苯丁酸酯,现用现配,但是黄色会一直加深,吸光值一直变大,奥利司他根本测不出阳性对照

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2楼2021-12-16 18:36:43
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求芝小木虫

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 不才xuzhouyi at 2021-12-16 18:36:43
是的,我的也是一直混浊,感觉像底物不溶于体系,实验一直失败,换了底物4-对硝基苯丁酸酯,现用现配,但是黄色会一直加深,吸光值一直变大,奥利司他根本测不出阳性对照
...

你好!最近也在用pnpb做,可以交流一下吗

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3楼2021-12-23 09:41:24
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城南a

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 不才xuzhouyi at 2021-12-16 18:36:43
是的,我的也是一直混浊,感觉像底物不溶于体系,实验一直失败,换了底物4-对硝基苯丁酸酯,现用现配,但是黄色会一直加深,吸光值一直变大,奥利司他根本测不出阳性对照
...

你好!我最近也在做胰脂肪酶抑制试验,加了底物之后出现沉淀,请问你解决这个问题了吗?
4楼2022-01-05 19:58:30
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