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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » pnpp法测脂肪酶活性
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丫星空丫

木虫 (小有名气)

[求助] pnpp法测脂肪酶活性

1、ph=8的tris-hcl缓冲液的配制：6.05g tris 置于 1l 烧杯中，去离子水溶解，加入 0.1%阿拉伯树胶粉（1g）、0.2%脱氧胆酸钠（2g），配置成 50mmol/l ph 8.0 的tris‐hcl缓冲液。（溶液浑浊）不加脱氧胆酸钠溶液澄清。
2、胰脂肪酶溶液：tris‐hcl 缓冲液溶解 0.25g 胰脂肪酶，混匀静置，5 000r/min 离心 5min，取上清液，配成 1.2mg/ml 胰脂肪酶溶液（ppl），‐20℃保存。
3、底物溶液：4‐硝基苯棕榈酸酯（pnpp）20mg 溶5ml异丙醇，再用 tris‐hcl 缓冲液定容到100ml。（溶液变浑浊）加入曲拉通-100，浑浊显现未改变。
4、底物溶液：4‐硝基苯棕榈酸酯（pnpp）2mg 溶10ml异丙醇。超声15min，溶液变成澄清，加入酶液后，变浑浊。

想请教一下相关科研领域的大神们，有没有做过相关实验，浑浊是怎么回事，该怎么解决，pnpp法测脂肪酶活性实验中要注意哪些细节，（附件图片是参考文献操作）已经试了好长时间了，急求帮助，谢谢！

pnpp法测脂肪酶活性


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吃得苦中苦，方为人上人
1楼 2021-12-13 22:03:44
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不才xuzhouyi

新虫 (初入文坛)
是的，我的也是一直混浊，感觉像底物不溶于体系，实验一直失败，换了底物4-对硝基苯丁酸酯，现用现配，但是黄色会一直加深，吸光值一直变大，奥利司他根本测不出阳性对照

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2楼2021-12-16 18:36:43
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求芝小木虫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 不才xuzhouyi at 2021-12-16 18:36:43
是的，我的也是一直混浊，感觉像底物不溶于体系，实验一直失败，换了底物4-对硝基苯丁酸酯，现用现配，但是黄色会一直加深，吸光值一直变大，奥利司他根本测不出阳性对照
...

你好！最近也在用pnpb做，可以交流一下吗

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3楼2021-12-23 09:41:24
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城南a

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 不才xuzhouyi at 2021-12-16 18:36:43
是的，我的也是一直混浊，感觉像底物不溶于体系，实验一直失败，换了底物4-对硝基苯丁酸酯，现用现配，但是黄色会一直加深，吸光值一直变大，奥利司他根本测不出阳性对照
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你好！我最近也在做胰脂肪酶抑制试验，加了底物之后出现沉淀，请问你解决这个问题了吗？
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4楼2022-01-05 19:58:30
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-Silence..

新虫 (小有名气)
我用的pnpb 阳性对照一直做不出来 稀释奥利司他的时候就会混浊

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5楼2022-05-07 00:44:20
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ZZZZ周

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 不才xuzhouyi at 2021-12-16 18:36:43
是的，我的也是一直混浊，感觉像底物不溶于体系，实验一直失败，换了底物4-对硝基苯丁酸酯，现用现配，但是黄色会一直加深，吸光值一直变大，奥利司他根本测不出阳性对照
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你好，想问一下你的问题解决了吗

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6楼2022-11-17 10:40:22
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ZZZZ周

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 城南a at 2022-01-05 19:58:30
你好！我最近也在做胰脂肪酶抑制试验，加了底物之后出现沉淀，请问你解决这个问题了吗？...

你好，我最近在做这个，请问解决了吗

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7楼2022-12-01 10:25:05
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ZZZZ周

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 不才xuzhouyi at 2021-12-16 18:36:43
是的，我的也是一直混浊，感觉像底物不溶于体系，实验一直失败，换了底物4-对硝基苯丁酸酯，现用现配，但是黄色会一直加深，吸光值一直变大，奥利司他根本测不出阳性对照
...

兼职一模一样问题

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8楼2023-02-19 15:35:04
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非北海不就

新虫 (小有名气)
求，做出来了吗，也是混浊
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9楼2025-08-15 10:36:00
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