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Lea__

新虫 (著名写手)

[求助] 金黄葡萄球菌及枯草芽孢杆菌感受态细胞制备及质粒转化已有2人参与

最近一直往金葡和枯草里导入质粒进行下一步实验,用的是ATCC6538和ATCC6633,RP4 plasmid。是不是野生型的这两种阳性菌无法形成感受态?还是宿主是阴性菌的大质粒RP4无法进入阳性菌?查了一些感受态制备方法都试过了,还是无法导入质粒。

是否用金葡RN4220和枯草WB600支撑感受态细胞的效果会更好一些?有没有虫友推荐一些易于制备感受态细胞的这两种菌?我们可以交换或者购买都行~

还是RP4本身无法在阳性菌中存在,需要其他质粒载体或者穿梭质粒?比如pC194等?想请教下大佬们做阳性菌的转化的大多用哪种质粒比较容易转进去?我们需要质粒上带有抗生素耐药基因即可。之前一直做的是阴性菌..感觉有很多细节还不十分清楚,希望得到大神们的指点,还请不吝赐教!感激不尽!
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qiulei0125

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by yyyycc2021 at 2022-07-28 15:34:41
请问楼主做出来了吗,可以交流一下经验;电转化的要求比较高,我做了半年的枯草电转化,成功率比较低,后来转做自然转化,效率比较高且方法比较简单

你好,请问自然转化是什么意思呢?我也在做葡萄球菌的转化,是经过RN4220修饰后电转到其他葡萄球菌中,结果怎么也转不进去

发自小木虫Android客户端
9楼2023-12-17 18:45:35
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