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水溶C100pro

新虫 (小有名气)

[求助] 关于血清瓶中培养基灭菌的几个问题 已有1人参与

关于液体培养基养厌氧菌的几个求助问题:
前提:因为是厌氧操作,所以准备用100mL血清瓶,培养基100mL,接种污泥5mL.培养基我分了母液A、B和C、D,A、B浓缩了10倍,需要高压灭菌。C、D浓缩了100倍,需要过滤灭菌,培养基的pH要调至7左右。(之前完全没接触过微生物实验,师兄师姐也没进行过厌氧培养基的灭菌)
①高压灭菌过程中我需要只在血清瓶中分别加母液A、B 10mL,进行高压灭菌,还是加A、B和80mL纯水。加了水我害怕血清瓶装的太满了,在灭菌过程中有隐患。但是不加水的话要将水单独灭菌,那么需要在哪里将水转移至血清瓶中才能保证不染菌呢?另外高压灭菌后的后续操作要在哪里进行,比如后续加过滤灭菌的母液C、D在哪里进行(超净台?生物安全柜?
②血清瓶在灭菌过程中需要用橡胶塞和铝盖密封吗?密封的话感觉高压蒸汽进不去,不密封的话要怎么弄咧?
③培养基最后要调pH,血清瓶瓶口很小,pH计插不进去要怎么测pH?
感谢各位老板,祝各位早日发财!救救小白吧
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heray22

新虫 (正式写手)

要密封灭菌,体积不要超过容积的2/3,在1/3~1/2最佳

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2楼2021-12-06 15:23:41
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heray22

新虫 (正式写手)

3楼2021-12-06 15:24:07
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heray22

新虫 (正式写手)

厌氧步骤:配好培养基,调好pH,封口 氮气吹,加刃天青厌氧指示剂,吹到厌氧从蓝色变粉红色到无色,边氮吹边分装到血清瓶,加橡胶塞铝箔盖密封,然后去灭菌。后面加药剂用一次性注射器加,

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4楼2021-12-06 15:27:25
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水溶C100pro

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by heray22 at 2021-12-06 15:27:25
厌氧步骤:配好培养基,调好pH,封口 氮气吹,加刃天青厌氧指示剂,吹到厌氧从蓝色变粉红色到无色,边氮吹边分装到血清瓶,加橡胶塞铝箔盖密封,然后去灭菌。后面加药剂用一次性注射器加,
...

谢谢解答,还想请问一下那接种的污泥要在什么时候加才能保证厌氧环境以及不染菌呢
5楼2021-12-23 14:09:16
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

血清瓶不能高压灭菌。
一般是环氧乙烷灭菌。
生物资源交流QQ群:1044518333
6楼2021-12-31 17:53:33
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