24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (2507)
>虫友互识 (134)
>导师招生 (69)
>文献求助 (50)
>休闲灌水 (46)
>硕博家园 (40)
>考研 (25)
>考博 (22)
>博后之家 (17)
>基金申请 (17)
>论文投稿 (17)
>论文道贺祈福 (16)
>找工作 (15)
>教师之家 (13)
>公派出国 (13)
>金属 (4)

返回列表

【悬赏金币】回答本帖问题，作者慧啊！将赠送您 10 个金币

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

慧啊！

新虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 777.1
散金: 25
沙发: 2
帖子: 327
在线: 23.4小时
虫号: 18154921
注册: 2019-10-12
性别: MM
专业: 凝聚态物性 II ：电子结构

[求助] 荧光光谱有多个峰，为什么已有1人参与

测得的荧光光谱，虽然是有一个大的明显的峰，但是这个峰有许多不规整的小峰，为什么会这样啊？不是平滑的曲线
难道是因为物质不纯？我做的是碳点，也没有纯不纯这一说法啊@Monash2011

回复此楼

» 猜你喜欢

1楼 2021-11-26 14:04:02

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

13813921817

木虫之王 (文坛精英)

上善若水，利万物而不争

应助: 8532 (教授)
金币: 58232.4
散金: 352
红花: 498
帖子: 11391
在线: 1122.2小时
虫号: 3562708
注册: 2014-11-27
性别: GG
专业: 高分子助剂

【答案】应助回帖

较为理想的熔解曲线是单峰曲线，如出现多峰有以下原因：

1）非特异性扩增：主要原因为引物特异性不好、Tm值较低或模板质量不高，可以根据设计原则设计新引物或者通过梯度 PCR 对引物退火温度（Tm值）进行优化，上调Tm值，选购质量较好的离心柱法核酸提取试剂，提高核酸提取质量，等等。

2）引物二聚体可通过琼脂糖凝胶电泳确认引物二聚体。引物二聚体在凝胶的底部形成扩散条带，通常位于100 bp以下。引物二聚体在熔解曲线内峰值一般位于75℃左右，如该峰显著请按照以下方面进行优化：

A.优化扩增条件，如提高退火温度，可利用梯度PCR，摸索最佳的Tm值。通常两步循环(由 95℃变性步骤直接进入 60℃退火和延伸步骤) 有利于强效扩增，因此引物设计时设定的成功退火温度为 60℃。

B.引物浓度太高，适当降低引物浓度。通常引物的Tm低于目的基因，熔解曲线上峰值在目的基因峰的左边。大多数情况下，每条引物的理想最终浓度为200 nM，但如有需要，可将浓度降至60nM。

C.cDNA模板带有基因组DNA污染：重新制备cDNA模板。在RNA提取完成后加入DNase对RNA进行处理，然后逆转录为cDNA。

如果排除以上原因还是出现熔解曲线多峰的情况，就要考虑及时更换试剂盒，避免耽误实验进度。