| 查看: 2081 | 回复: 4 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者慧啊！将赠送您 10 个金币 | ||
慧啊！新虫 (正式写手)
|
[求助]
荧光光谱有多个峰，为什么 已有1人参与
|
|
|
测得的荧光光谱，虽然是有一个大的明显的峰，但是这个峰有许多不规整的小峰，为什么会这样啊？不是平滑的曲线 难道是因为物质不纯？我做的是碳点，也没有纯不纯这一说法啊@Monash2011 |
回复此楼» 猜你喜欢
327求调剂
已经有3人回复
-
NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗
已经有13人回复
-
0856专硕279求调剂
已经有5人回复
-
本人考085602 化学工程 专硕
已经有7人回复
-
22408总分284求调剂
已经有3人回复
-
070305求调剂
已经有4人回复
-
材料专硕326求调剂
已经有4人回复
-
294求调剂
已经有4人回复
-
085601材料工程315分求调剂
已经有3人回复
-
311求调剂
已经有3人回复
869417668
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 219
- 散金: 50
- 帖子: 115
- 在线: 90.7小时
- 虫号: 2487069
- 注册: 2013-05-29
- 性别: GG
- 专业: 药剂学
2楼2021-11-26 15:40:42
15797891455
新虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3013.3
- 红花: 7
- 沙发: 32
- 帖子: 1858
- 在线: 194小时
- 虫号: 5635208
- 注册: 2017-02-18
- 性别: GG
- 专业: 光谱分析
3楼2021-12-31 07:25:15
4楼2021-12-31 08:35:07
13813921817
木虫之王 (文坛精英)
上善若水，利万物而不争
- 应助: 8535 (教授)
- 金币: 58316.4
- 散金: 352
- 红花: 499
- 帖子: 11394
- 在线: 1123.8小时
- 虫号: 3562708
- 注册: 2014-11-27
- 性别: GG
- 专业: 高分子助剂
【答案】应助回帖
|
较为理想的熔解曲线是单峰曲线，如出现多峰有以下原因： 1）非特异性扩增：主要原因为引物特异性不好、Tm值较低或模板质量不高，可以根据设计原则设计新引物或者通过梯度 PCR 对引物退火温度（Tm值）进行优化，上调Tm值，选购质量较好的离心柱法核酸提取试剂，提高核酸提取质量，等等。 2）引物二聚体 可通过琼脂糖凝胶电泳确认引物二聚体。引物二聚体在凝胶的底部形成扩散条带，通常位于100 bp以下。引物二聚体在熔解曲线内峰值一般位于75℃左右，如该峰显著请按照以下方面进行优化： A.优化扩增条件，如提高退火温度，可利用梯度PCR，摸索最佳的Tm值。通常两步循环(由 95℃变性步骤直接进入 60℃退火和延伸步骤) 有利于强效扩增，因此引物设计时设定的成功退火温度为 60℃。 B.引物浓度太高，适当降低引物浓度。通常引物的Tm低于目的基因，熔解曲线上峰值在目的基因峰的左边。大多数情况下，每条引物的理想最终浓度为200 nM，但如有需要，可将浓度降至60nM。 C.cDNA模板带有基因组DNA污染：重新制备cDNA模板。在RNA提取完成后加入DNase对RNA进行处理，然后逆转录为cDNA。 如果排除以上原因还是出现熔解曲线多峰的情况，就要考虑及时更换试剂盒，避免耽误实验进度。 |
5楼2023-07-23 17:41:36
