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蝶谷医仙

新虫 (小有名气)

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[交流] 求助：怎样用培养的细胞做PCR

培养了一大堆血管内皮细胞，老板说该用来做PCR了，说完就走了，老板是美国人，在下刚进实验室没几天，完全找不到北。
补充一下，我的课题大概思路是这样的，血管内皮细胞的某一段DNA序列（目前我对这段基因完全不了解）产生一种标记性蛋白，现在要检测加入某种生长因子后对产生这种蛋白有何影响。所以先培养了些血管内皮细胞，下一步我该怎么进行呢？为什么要我做PCR？其目的何在？我现在有一大堆细胞，该怎么来进行PCR？第一步是什么？恳请高手们指点，多谢啊！

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-6 at 08:33 ]

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1楼 2009-08-25 03:30:20

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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

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司马诸葛(金币+2,VIP+0):奖励一下 8-25 14:17

我本科做的好像跟这个比较像，就是植物（拟南芥和菊花）响应外界刺激（声波）所做出的反应。技术用的是RT-PCR。说全了就是差异显示逆转录pcr，即DDRT-PCR。
技术路线是：提取总RNA--逆转录PCR--跑PAGE胶。通过比较刺激组和对照组（未刺激组）的DNA电泳图，观察哪些基因条带发生了变化，变多了，变少了，变没了，还是其他的变化等等。
当然，这种生物应力除了我做的声波外，还有其他的类型，包括光照、低温、高温、风等等，也包括你做的这种施加某种物质。
你可以在硕博论文数据库中，找找这方面的毕业论文。据我所知，重庆大学做生物应力做的比较多。